小檗堿通過(guò)增加能量消耗治療肥胖的作用和機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　小檗堿(Berberine，BBR)又名黃連素，是傳統(tǒng)中藥黃連的主要有效成分。近年研究發(fā)現(xiàn)BBR具有治療2型糖尿病以及改善糖脂代謝等多種作用。然而，關(guān)于BBR通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體能量代謝減輕體重尚未見(jiàn)諸報(bào)道。本研究旨在通過(guò)觀(guān)察BBR對(duì)肥胖小鼠糖、脂及能量代謝指標(biāo)以及代謝相關(guān)因子的影響，探討B(tài)BR用于治療肥胖及2型糖尿病的可行性及其作用機(jī)制。
　　方法:
　　8周齡db/db小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后隨即分為BBR干預(yù)組和

2、空白溶劑對(duì)照組，監(jiān)測(cè)動(dòng)物進(jìn)食量、體重、體溫等代謝指標(biāo)，利用CLAMS代謝監(jiān)測(cè)系統(tǒng)觀(guān)察BBR對(duì)db/db小鼠活動(dòng)及能量代謝的影響，并用PET-CT檢測(cè)組織代謝情況，檢測(cè)小鼠隨機(jī)血糖、血脂并進(jìn)行ITT、IPGTT、PTT實(shí)驗(yàn)，分離白色脂肪、棕色脂肪、腓腸肌，用以電鏡、組織化學(xué)等形態(tài)學(xué)觀(guān)察以及分子學(xué)檢測(cè)，利用原代培養(yǎng)的脂肪細(xì)胞、C3H10T1/2多潛能細(xì)胞系及C2C12骨骼肌細(xì)胞，檢測(cè)線(xiàn)粒體DNA拷貝數(shù)及檸檬酸合成酶活性等方法觀(guān)察BBR在體外

3、細(xì)胞中對(duì)線(xiàn)粒體生成和功能以及能量代謝相關(guān)因子的影響，并應(yīng)用報(bào)告基因、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫印跡、腺病毒介導(dǎo)的靶分子失活及染色質(zhì)免疫沉淀等技術(shù)對(duì)BBR上述作用的機(jī)制進(jìn)行了深入探討。
　　結(jié)果:
　　BBR可以減少db/db小鼠進(jìn)食量，且在不影響活動(dòng)量的情況下升高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基礎(chǔ)代謝率，抑制體重增長(zhǎng)，降低肥胖小鼠的脂肪含量，增強(qiáng)棕色脂肪代謝活性，降低血糖、血脂水平，改善糖耐量，增加胰島素敏感性。另外，BBR促進(jìn)棕色脂肪、白色脂肪及骨骼

4、肌細(xì)胞中線(xiàn)粒體生成和功能改善，使白色脂肪細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)脂滴體積明顯變小，UCP1表達(dá)明顯增多。BBR能夠激活脂肪細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞AMPK活性，促進(jìn)PGC-1α及其他代謝相關(guān)因子表達(dá)。在C3H10和C2C12細(xì)胞中過(guò)表達(dá)失活型AMPKα亞基，阻斷內(nèi)源性AMPK作用后小檗堿不再促進(jìn)PGC-1α表達(dá)并且對(duì)線(xiàn)粒體生成和功能的作用也消失。另外，在C3H10細(xì)胞中BBR可以協(xié)同PGC-1α增加UCP1啟動(dòng)子的活性，而且這一協(xié)同作用依賴(lài)于PGC-1α分

5、子上的AMPK特異性磷酸化位點(diǎn)。ChIP實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在C3H10細(xì)胞中小檗堿能夠使UCP1啟動(dòng)子區(qū)的PGC-1α含量明顯增加。
　　結(jié)論:
　　1、BBR可以使db/db小鼠基礎(chǔ)代謝率升高，體重降低;2、BBR降低db/db小鼠血糖、血脂水平，改善糖耐量和胰島素抵抗;3、BBR增強(qiáng)db/db小鼠棕色脂肪活性，尤為重要的是，它可以使白色脂肪棕色化;4、BBR促進(jìn)脂肪細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞線(xiàn)粒體生成和功能;5、BBR通過(guò)激活A(yù)MPK