過瘤胃蛋氨酸對奶牛夏季生產性能及淋巴細胞凋亡調控的影響.pdf

1、本研究目的在于揭示夏季熱應激下補飼過瘤胃蛋氨酸對奶牛生產性能及淋巴細胞凋亡調控的影響。通過定期測定過瘤胃蛋氨酸對奶牛產奶量、乳成分的影響以及血液氨基酸變化趨勢；全血自動分析儀分析奶牛外周血液學指標；流式細胞儀分析淋巴細胞凋亡率；采用夾心ELSIA的方法測定血清HsP700D值；放射免疫方法測定奶牛血清T<,3>、T<,4>和皮質醇水平；半定量RT-PCR分析外周血液淋巴細胞HSF1mRNA、Bcl-2mRNA、BaxmRNA基因表達水平

2、；熒光定量PCR分析Bcl-2mRNA、BaxmRNA、p53mRNA基因表達。研究結果如下： 1.過瘤胃蛋氨酸對奶牛產奶量、乳成分以及血液氨基酸含量的影響 選用16頭泌乳中期奶牛按拉丁方設計進行試驗，研究飼糧中補充過瘤胃蛋氨酸0，8，12和16g．d<'-1>對產奶量、乳成分以及血液氨基酸含量的影響。結果表明，與對照組相比，補飼過瘤胃蛋氨酸能夠提高奶牛乳蛋白、乳脂率和酪蛋白水平。補飼過瘤胃蛋氨酸有增加產奶量的趨勢，能提

3、高高產奶牛乳蛋白和乳脂肪量。9頭泌乳中期荷斯坦奶牛在補飼過瘤胃蛋氨酸和普通蛋氨酸前后連續(xù)采血44小時，探索蛋氨酸的吸收變化曲線，發(fā)現(xiàn)補飼過瘤胃蛋氨酸后12～16小時達到吸收高峰，過瘤胃蛋氨酸能顯著提高奶牛血清蛋氨酸水平，而補飼普通蛋氨酸則無明顯影響。補飼過瘤胃蛋氨酸和普通蛋氨酸對血清總氨基酸水平均無顯著影響。 16頭泌乳奶牛進行配對試驗，研究飼糧中補充12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸對熱應激下奶牛產奶量和乳成分的影響。結果表明

4、，與對照組相比，補飼過瘤胃蛋氨酸有促進產奶，提高奶牛乳蛋白、乳脂率和非脂固形物以及降低牛奶中體細胞數(shù)的趨勢。表明奶牛補飼過瘤胃蛋氨酸有促進產奶，減緩熱應激對奶牛泌乳的影響，提高奶牛血液中蛋氨酸的水平，但不能顯著改變血液總氨基酸的水平。 2.過瘤胃蛋氨酸對夏季泌乳奶牛外周血液指標的影響 全自動血細胞分析儀分析日平均溫度在33℃下，奶牛補飼不同劑量的過瘤胃蛋氨酸，分析奶牛外周血液紅細胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、白細

5、胞總數(shù)(WBC)、中性粒細胞百分比(GRAN％)、淋巴細胞百分比(LYMPH％)、單核細胞百分比(MID％)、中性粒細胞計數(shù)(GRAN)、淋巴細胞計數(shù)(LYMPH)、單核細胞計數(shù)(MID)、紅細胞壓積(HCT)、平均紅細胞體積(MCV)、平均血紅蛋白量(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細胞分布寬度(RDW)、血小板計數(shù)(PLT)、平均血小板體積(MPV)和血小板壓積(PCT)。16頭泌乳奶牛進行配對試驗，隨機分為對照組和試驗組

6、，研究飼糧中補充12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸，分析血清中谷雨轉氨酶(GPT)、谷草轉氨酶(GOT)、總蛋白(TP)、白蛋白、球蛋白、葡萄糖(GLU)、乳酸脫氫酶(LDH)、堿性磷酸酶(ALP)、磷酸肌酸激酶(CPK)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽過氧化物酶(GSH-Px)、和丙二醛(MDA)。研究發(fā)現(xiàn)過瘤胃蛋氨酸能夠改變奶牛外周血常規(guī)指標，飼喂過瘤胃蛋氨酸極顯著的降低夏季奶牛外周血液紅細胞計數(shù)；血紅蛋白呈增加趨勢，20g．d

7、<'-1>組差異極顯著，不同劑量過瘤胃蛋氨酸對血紅蛋白影響差異不明顯。飼喂過瘤胃蛋氨酸有提高奶牛外周血液中自細胞總數(shù)、中性粒細胞計數(shù)和淋巴細胞計數(shù)趨勢；飼喂20 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸能夠明顯提高奶牛外周血液單核細胞計數(shù)。飼喂過瘤胃蛋氨酸，血液紅細胞壓積呈下降趨勢，平均紅細胞體積、平均血紅蛋白量和平均紅細胞蛋白濃度呈上升趨勢，20 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸顯著提高紅細胞分布寬度；血小板計數(shù)呈上升趨勢，其中16 g．d<'-1>

8、和20 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸能顯著提高血小板計數(shù)；平均血小板體積下降，血小板壓積呈上升趨勢。 與對照組相比，飼喂12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸，奶牛血液中谷丙轉氨酶(GPT)、谷草轉氨酶(GOT)、白蛋白水平和磷酸肌酸激酶(CPK)均呈下降趨勢；補飼過瘤胃蛋氨酸能夠明顯降低奶牛外周血液中乳酸脫氫酶(LDH)水平；總蛋白、球蛋白、堿性磷酸酶(ALP)和葡萄糖(GLU)水平呈增加趨勢。與對照組相比，補飼過瘤胃蛋氨酸能夠提

9、高奶牛外周血液中SOD和GSH-Px水平，降低MDA水平。過瘤胃蛋氨酸能夠促進奶牛血液中血紅蛋白量和血小板等的生成，改變白細胞類型，表明過瘤胃蛋氨酸有提高降低奶牛熱應激，促進細胞分化的作用，提高機體免疫力的作用。能夠減弱熱應激對奶牛肝臟和肌肉細胞的損傷，保護細胞膜免受熱應激的損傷等作用，有緩解熱應激和加速自由基的清除，減少自由基對細胞膜和。DNA的損傷，提高抗氧化酶的活力。 3.過瘤胃蛋氨酸對夏季泌乳奶牛外周血液淋巴細胞凋亡的影

10、響 用流式細胞儀分析夏季熱應激下奶牛補飼過瘤胃蛋氨酸對其外周血液淋巴細胞凋亡率的影響。結果發(fā)現(xiàn)對照組淋巴細胞凋亡率最高(8.38％)，飼喂過瘤胃蛋氨酸能夠明顯降低夏季高溫奶牛外周血液淋巴細胞凋亡率，12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組淋巴細胞凋亡率最低(2.43％)，16和20 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組淋巴細胞凋亡率分別為3.57％和3.92％，與對照組相比，差異極顯著。表明過瘤胃蛋氨酸能夠抑制因高溫熱應激而導致的細胞凋亡

11、，并與蛋氨酸的添加量有關。 4.過瘤胃蛋氨酸對夏季泌乳奶牛血清HSP70和T<,3>、T<,4>以及皮質醇的影響 采用夾心ELSIA的方法測定血清HSP70OD值，放射免疫方法測定奶牛血清T<,3>、T<,4>和皮質醇水平，研究補飼過瘤胃蛋氨酸對奶牛血清HSP70、T<,3>、T<,4>以及皮質醇分泌的影響。結果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，飼喂12和16 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組，奶牛血清中HSP70OD值分別提高了52.

12、61％和51.51％，差異顯著，飼喂20 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組，奶牛血清中HSP70 OD值提高了26.47％，差異不顯著。與對照組相比，飼喂12、16和20 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸，奶牛血清T<,3>濃度分別提高了6.94％、5.57％和5.26％；奶牛血清T<,4>濃度分別提高了26.19％、26.83％和33.88％。12 g．d<'-1>組奶牛血清皮質醇水平下降了12.15％，16和20 g．d<'-1>組奶牛血

13、清皮質醇水平分別提高了42.99％和78.26％。表明夏季奶牛補飼過瘤胃蛋氨酸，能夠促進HSP70的表達，緩解熱應激對奶牛血液皮質激素分泌的影響。 5.過瘤胃蛋氨酸對奶牛外周血液淋巴細胞凋亡相關基因表達的影響 用半定量RT-PCR分析過瘤胃蛋氨酸對奶牛外周血液淋巴細胞HSF1mRNA、Bcl-2mRNA、BaxmRNA基因表達水平的影響。結果發(fā)現(xiàn)，補飼12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組奶牛外周血液淋巴細胞HSF1mRN

14、A水平最低，與對照組相比差異顯著，與對照組相比，補飼16和20 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組奶牛外周血液淋巴細胞HSF1mRNA豐度降低，但差異不顯著；補飼過瘤胃蛋氨酸能夠提高奶牛外周血液淋巴細胞Bcl-2mRNA豐度，在12 g．d<'-1>組Bcl-2mRNA豐度最高，與對照組和16 g．d<'-1>組相比，差異極顯著，與20 g．d<'-1>組相比，差異不顯著，16 g．d<'-1>和20 g．d<'-1>組與對照組相比，差異也

15、不顯著；補飼過瘤胃蛋氨酸能夠降低夏季奶牛外周血液淋巴細胞Bax-αmRNA豐度的降低，12 g．d<'-1>組最低，但差異均不顯著；Bcl-2mRNA/Bax-αmRNA在12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組最高，與對照組相比，差異極顯著，16和20 g．d<'-1>與對照組相比，差異不顯著。表明過瘤胃蛋氨酸能夠抑制奶牛淋巴細胞Bax和HSF1基因的表達，促進Bcl-2基因表達，抑制淋巴細胞凋亡。 選用16頭泌乳奶牛，試驗組8頭

16、補充12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸，用熒光定量PCR法研究對夏季奶牛外周血液淋巴細胞凋亡基因的影響。結果表明，飼喂12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組奶牛在第7d外周血液淋巴細胞Bcl-2 mRNA基因豐度提高了14.12％，BaxmRNA基因豐度下降了35.05％，Bcl-2mRNA與BaxmRNA比值提高了92.15％，但差異均不顯著；p53mRNA基因豐度降低了40.4％，差異極顯著。與對照組相比，在第14d過瘤胃蛋氨酸組奶牛