過瘤胃蛋氨酸對奶牛夏季生產(chǎn)性能及淋巴細(xì)胞凋亡調(diào)控的影響.pdf

1、本研究目的在于揭示夏季熱應(yīng)激下補(bǔ)飼過瘤胃蛋氨酸對奶牛生產(chǎn)性能及淋巴細(xì)胞凋亡調(diào)控的影響。通過定期測定過瘤胃蛋氨酸對奶牛產(chǎn)奶量、乳成分的影響以及血液氨基酸變化趨勢；全血自動分析儀分析奶牛外周血液學(xué)指標(biāo)；流式細(xì)胞儀分析淋巴細(xì)胞凋亡率；采用夾心ELSIA的方法測定血清HsP700D值；放射免疫方法測定奶牛血清T<,3>、T<,4>和皮質(zhì)醇水平；半定量RT-PCR分析外周血液淋巴細(xì)胞HSF1mRNA、Bcl-2mRNA、BaxmRNA基因表達(dá)水平

2、；熒光定量PCR分析Bcl-2mRNA、BaxmRNA、p53mRNA基因表達(dá)。研究結(jié)果如下： 1.過瘤胃蛋氨酸對奶牛產(chǎn)奶量、乳成分以及血液氨基酸含量的影響 選用16頭泌乳中期奶牛按拉丁方設(shè)計進(jìn)行試驗，研究飼糧中補(bǔ)充過瘤胃蛋氨酸0，8，12和16g．d<'-1>對產(chǎn)奶量、乳成分以及血液氨基酸含量的影響。結(jié)果表明，與對照組相比，補(bǔ)飼過瘤胃蛋氨酸能夠提高奶牛乳蛋白、乳脂率和酪蛋白水平。補(bǔ)飼過瘤胃蛋氨酸有增加產(chǎn)奶量的趨勢，能提

3、高高產(chǎn)奶牛乳蛋白和乳脂肪量。9頭泌乳中期荷斯坦奶牛在補(bǔ)飼過瘤胃蛋氨酸和普通蛋氨酸前后連續(xù)采血44小時，探索蛋氨酸的吸收變化曲線，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)飼過瘤胃蛋氨酸后12～16小時達(dá)到吸收高峰，過瘤胃蛋氨酸能顯著提高奶牛血清蛋氨酸水平，而補(bǔ)飼普通蛋氨酸則無明顯影響。補(bǔ)飼過瘤胃蛋氨酸和普通蛋氨酸對血清總氨基酸水平均無顯著影響。 16頭泌乳奶牛進(jìn)行配對試驗，研究飼糧中補(bǔ)充12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸對熱應(yīng)激下奶牛產(chǎn)奶量和乳成分的影響。結(jié)果表明

4、，與對照組相比，補(bǔ)飼過瘤胃蛋氨酸有促進(jìn)產(chǎn)奶，提高奶牛乳蛋白、乳脂率和非脂固形物以及降低牛奶中體細(xì)胞數(shù)的趨勢。表明奶牛補(bǔ)飼過瘤胃蛋氨酸有促進(jìn)產(chǎn)奶，減緩熱應(yīng)激對奶牛泌乳的影響，提高奶牛血液中蛋氨酸的水平，但不能顯著改變血液總氨基酸的水平。 2.過瘤胃蛋氨酸對夏季泌乳奶牛外周血液指標(biāo)的影響 全自動血細(xì)胞分析儀分析日平均溫度在33℃下，奶牛補(bǔ)飼不同劑量的過瘤胃蛋氨酸，分析奶牛外周血液紅細(xì)胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、白細(xì)

5、胞總數(shù)(WBC)、中性粒細(xì)胞百分比(GRAN％)、淋巴細(xì)胞百分比(LYMPH％)、單核細(xì)胞百分比(MID％)、中性粒細(xì)胞計數(shù)(GRAN)、淋巴細(xì)胞計數(shù)(LYMPH)、單核細(xì)胞計數(shù)(MID)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均血紅蛋白量(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞分布寬度(RDW)、血小板計數(shù)(PLT)、平均血小板體積(MPV)和血小板壓積(PCT)。16頭泌乳奶牛進(jìn)行配對試驗，隨機(jī)分為對照組和試驗組

6、，研究飼糧中補(bǔ)充12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸，分析血清中谷雨轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、總蛋白(TP)、白蛋白、球蛋白、葡萄糖(GLU)、乳酸脫氫酶(LDH)、堿性磷酸酶(ALP)、磷酸肌酸激酶(CPK)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽過氧化物酶(GSH-Px)、和丙二醛(MDA)。研究發(fā)現(xiàn)過瘤胃蛋氨酸能夠改變奶牛外周血常規(guī)指標(biāo)，飼喂過瘤胃蛋氨酸極顯著的降低夏季奶牛外周血液紅細(xì)胞計數(shù)；血紅蛋白呈增加趨勢，20g．d

7、<'-1>組差異極顯著，不同劑量過瘤胃蛋氨酸對血紅蛋白影響差異不明顯。飼喂過瘤胃蛋氨酸有提高奶牛外周血液中自細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞計數(shù)和淋巴細(xì)胞計數(shù)趨勢；飼喂20 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸能夠明顯提高奶牛外周血液單核細(xì)胞計數(shù)。飼喂過瘤胃蛋氨酸，血液紅細(xì)胞壓積呈下降趨勢，平均紅細(xì)胞體積、平均血紅蛋白量和平均紅細(xì)胞蛋白濃度呈上升趨勢，20 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸顯著提高紅細(xì)胞分布寬度；血小板計數(shù)呈上升趨勢，其中16 g．d<'-1>

8、和20 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸能顯著提高血小板計數(shù)；平均血小板體積下降，血小板壓積呈上升趨勢。 與對照組相比，飼喂12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸，奶牛血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、白蛋白水平和磷酸肌酸激酶(CPK)均呈下降趨勢；補(bǔ)飼過瘤胃蛋氨酸能夠明顯降低奶牛外周血液中乳酸脫氫酶(LDH)水平；總蛋白、球蛋白、堿性磷酸酶(ALP)和葡萄糖(GLU)水平呈增加趨勢。與對照組相比，補(bǔ)飼過瘤胃蛋氨酸能夠提

9、高奶牛外周血液中SOD和GSH-Px水平，降低MDA水平。過瘤胃蛋氨酸能夠促進(jìn)奶牛血液中血紅蛋白量和血小板等的生成，改變白細(xì)胞類型，表明過瘤胃蛋氨酸有提高降低奶牛熱應(yīng)激，促進(jìn)細(xì)胞分化的作用，提高機(jī)體免疫力的作用。能夠減弱熱應(yīng)激對奶牛肝臟和肌肉細(xì)胞的損傷，保護(hù)細(xì)胞膜免受熱應(yīng)激的損傷等作用，有緩解熱應(yīng)激和加速自由基的清除，減少自由基對細(xì)胞膜和。DNA的損傷，提高抗氧化酶的活力。 3.過瘤胃蛋氨酸對夏季泌乳奶牛外周血液淋巴細(xì)胞凋亡的影

10、響 用流式細(xì)胞儀分析夏季熱應(yīng)激下奶牛補(bǔ)飼過瘤胃蛋氨酸對其外周血液淋巴細(xì)胞凋亡率的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)對照組淋巴細(xì)胞凋亡率最高(8.38％)，飼喂過瘤胃蛋氨酸能夠明顯降低夏季高溫奶牛外周血液淋巴細(xì)胞凋亡率，12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組淋巴細(xì)胞凋亡率最低(2.43％)，16和20 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組淋巴細(xì)胞凋亡率分別為3.57％和3.92％，與對照組相比，差異極顯著。表明過瘤胃蛋氨酸能夠抑制因高溫?zé)釕?yīng)激而導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡

11、，并與蛋氨酸的添加量有關(guān)。 4.過瘤胃蛋氨酸對夏季泌乳奶牛血清HSP70和T<,3>、T<,4>以及皮質(zhì)醇的影響 采用夾心ELSIA的方法測定血清HSP70OD值，放射免疫方法測定奶牛血清T<,3>、T<,4>和皮質(zhì)醇水平，研究補(bǔ)飼過瘤胃蛋氨酸對奶牛血清HSP70、T<,3>、T<,4>以及皮質(zhì)醇分泌的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，飼喂12和16 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組，奶牛血清中HSP70OD值分別提高了52.

12、61％和51.51％，差異顯著，飼喂20 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組，奶牛血清中HSP70 OD值提高了26.47％，差異不顯著。與對照組相比，飼喂12、16和20 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸，奶牛血清T<,3>濃度分別提高了6.94％、5.57％和5.26％；奶牛血清T<,4>濃度分別提高了26.19％、26.83％和33.88％。12 g．d<'-1>組奶牛血清皮質(zhì)醇水平下降了12.15％，16和20 g．d<'-1>組奶牛血

13、清皮質(zhì)醇水平分別提高了42.99％和78.26％。表明夏季奶牛補(bǔ)飼過瘤胃蛋氨酸，能夠促進(jìn)HSP70的表達(dá)，緩解熱應(yīng)激對奶牛血液皮質(zhì)激素分泌的影響。 5.過瘤胃蛋氨酸對奶牛外周血液淋巴細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響 用半定量RT-PCR分析過瘤胃蛋氨酸對奶牛外周血液淋巴細(xì)胞HSF1mRNA、Bcl-2mRNA、BaxmRNA基因表達(dá)水平的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)飼12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組奶牛外周血液淋巴細(xì)胞HSF1mRN

14、A水平最低，與對照組相比差異顯著，與對照組相比，補(bǔ)飼16和20 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組奶牛外周血液淋巴細(xì)胞HSF1mRNA豐度降低，但差異不顯著；補(bǔ)飼過瘤胃蛋氨酸能夠提高奶牛外周血液淋巴細(xì)胞Bcl-2mRNA豐度，在12 g．d<'-1>組Bcl-2mRNA豐度最高，與對照組和16 g．d<'-1>組相比，差異極顯著，與20 g．d<'-1>組相比，差異不顯著，16 g．d<'-1>和20 g．d<'-1>組與對照組相比，差異也

15、不顯著；補(bǔ)飼過瘤胃蛋氨酸能夠降低夏季奶牛外周血液淋巴細(xì)胞Bax-αmRNA豐度的降低，12 g．d<'-1>組最低，但差異均不顯著；Bcl-2mRNA/Bax-αmRNA在12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組最高，與對照組相比，差異極顯著，16和20 g．d<'-1>與對照組相比，差異不顯著。表明過瘤胃蛋氨酸能夠抑制奶牛淋巴細(xì)胞Bax和HSF1基因的表達(dá)，促進(jìn)Bcl-2基因表達(dá)，抑制淋巴細(xì)胞凋亡。 選用16頭泌乳奶牛，試驗組8頭

16、補(bǔ)充12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸，用熒光定量PCR法研究對夏季奶牛外周血液淋巴細(xì)胞凋亡基因的影響。結(jié)果表明，飼喂12 g．d<'-1>過瘤胃蛋氨酸組奶牛在第7d外周血液淋巴細(xì)胞Bcl-2 mRNA基因豐度提高了14.12％，BaxmRNA基因豐度下降了35.05％，Bcl-2mRNA與BaxmRNA比值提高了92.15％，但差異均不顯著；p53mRNA基因豐度降低了40.4％，差異極顯著。與對照組相比，在第14d過瘤胃蛋氨酸組奶牛