喹噁啉類定量分析方法及脫氧速率研究.pdf

1、喹噁啉類是化學(xué)合成的具有抗菌、促生長作用的動(dòng)物專用藥，被廣泛用作豬、雞、魚等動(dòng)物的飼料添加劑，主要包括卡巴氧、喹乙醇、喹賽多、喹烯酮和乙酰甲喹等5種藥物。因毒副作用，卡巴氧和喹乙醇已被禁止或限制使用。中國相繼批準(zhǔn)了乙酰甲喹和喹烯酮的使用，并正在開發(fā)較安全的喹賽多等同類替代產(chǎn)品。但喹噁啉類的濫用和非法使用現(xiàn)象普遍，藥物毒性及殘留造成的潛在的食品安全危害不容忽視，開展這類藥物毒性作用機(jī)制及其在飼料和動(dòng)物源食品中的分析方法研究具有重大意義。喹

2、噁啉類分析方法研究禁錮于單一基質(zhì)、單組分，不同基質(zhì)中多種喹噁啉類分析方法研究未見報(bào)道。喹噁啉類毒性研究也僅局限于推測其源于脫氧過程，但未見毒性與脫氧速率關(guān)系的闡述。本課題從喹噁啉類分析方法展開研究，深入探索并建立飼料中喹噁啉類和動(dòng)物可食性組織中喹噁啉類殘留標(biāo)示物的同時(shí)分析方法，進(jìn)而初步探討喹噁啉類脫氧速率和毒性的關(guān)系，具體為以下3個(gè)研究體系內(nèi)容。這些研究為這類藥物的殘留監(jiān)控和毒性作用機(jī)制等研究提供技術(shù)支持和理論依據(jù)，對動(dòng)物源食品安全評價(jià)

3、具有指導(dǎo)意義和參考價(jià)值。 1.飼料中喹噁啉類藥物同時(shí)分析方法研究 深入探索樣品前處理和檢測方法，確定最佳條件，建立豬、雞、魚飼料中5種喹噁啉類高效液相色譜同時(shí)分析方法。樣品經(jīng)甲醇-水-乙腈(35:35:30，v/v/v)溶劑超聲提取，中性氧化鋁固相萃取小柱凈化，高效液相色譜梯度洗脫分離，380nm紫外波長測定。不同飼料樣品中，5種藥物的CCa小于0.45mg/kg，CCβ小于0.75mg/kg；在1、5、50和200mg

4、/kg的添加濃度，除喹賽多(>75％)外，其它4種藥物的回收率為92.1％～104.3％，日內(nèi)、日間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.0％～13％。 超聲提取和固相萃取凈化，可以節(jié)省樣品前處理時(shí)間，避免有毒試劑的使用，減少有機(jī)試劑用量，消除飼料基質(zhì)對喹噁啉類藥物測定干擾。儀器測定條件選擇過程中，采用流動(dòng)相梯度洗脫方式，考察了流動(dòng)相成分和比例對5種喹噁啉類藥物同時(shí)分析的影響，選用380nm作為紫外檢測器測定波長，進(jìn)一步對5種喹噁啉類藥物進(jìn)行篩選，

5、對比不同溶劑對藥物測定分析結(jié)果差異，確定5種喹噁啉類藥物同時(shí)分離分析的高效液相色譜條件。 本方法操作簡便、材料易得、環(huán)境污染小，可以廣泛應(yīng)用于豬、雞、魚等飼料中多種喹噁啉類的監(jiān)測，對飼料中其它化合物的多組分分析方法研究具有參考價(jià)值。 2.動(dòng)物可食性組織中喹噁啉類多殘留分析方法研究 探討樣品提取、凈化和測定溶劑等條件，建立豬、雞、魚肌肉及豬、雞肝臟組織中喹噁啉-2-羧酸和3-甲基喹噁啉-2-羧酸的高效液相色譜多殘留

6、分析方法。動(dòng)物組織樣品采用偏磷酸甲醇溶液水解，乙酸乙酯提取，MAX陰離子固相萃取小柱凈化，堿性甲醇溶解濃縮殘?jiān)?，高效液相色譜分離，320nm紫外波長測定。豬、雞、魚肌肉組織中喹噁啉-2-羧酸的CCa為0.7～1.0μg/kg，CCβ為1.3～1.7μg/kg；3-甲基喹噁啉-2-羧酸的CCa為1.2～2.6μg/kg，CCβ為2.0～4.4μg/kg。豬、雞肝臟組織中喹噁啉-2-羧酸的CCa為2.5～2.6μg/kg，CCβ為4.3～5

7、.6μg/kg：3-甲基喹噁啉-2-羧酸的CCa為2.1～2.4μg/kg，CCβ為4.4～5.6μg/kg。喹噁啉-2-羧酸和3-甲基喹噁啉-2-羧酸在各動(dòng)物肌肉組織中添加濃度為2.0～16μg/kg，回收率為70.7％～104.3％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差<20％：在豬、雞肝臟組織添加濃度為10～50μg/kg，回收率為72.3％～80.7％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差<13％。 酸性環(huán)境水解樣品，結(jié)合陰離子固相萃取小柱凈化，簡化了樣品前處理步驟，

8、避免強(qiáng)酸、強(qiáng)堿和有毒試劑的使用，可有效消除基質(zhì)對藥物測定的干擾，擴(kuò)大了分析樣品范圍，方法靈敏度高。對比不同樣品溶劑對兩種分析物紫外吸收的影響，明確其經(jīng)樣品前處理后紫外吸收波長的變化，選用堿性甲醇溶劑，抵消了分析物紫外吸光度變化值，減小了回收率測定誤差，提高了分析方法的準(zhǔn)確度。 本方法樣品前處理簡單、基質(zhì)干擾少、分析范圍廣、檢測靈敏度高，基本達(dá)到國際領(lǐng)先水平，可廣泛應(yīng)用于喹噁啉類藥物的殘留監(jiān)測，對動(dòng)物組織中多殘留分析方法研究具有指

9、導(dǎo)意義，為動(dòng)物性食品安全評價(jià)提供技術(shù)支持。 3.喹噁啉類脫氧速率研究 建立脫二氧喹賽多、脫二氧喹烯酮和脫二氧喹乙醇的高效液相色譜測定方法，為喹噁啉類脫氧產(chǎn)物定性分析提供技術(shù)方法。3種化合物經(jīng)高效液相色譜流動(dòng)相梯度洗脫分離，二極管陣列檢測器測定，檢測限為0.01μmol/L，定量限為0.02μmol/L，在0.01～10μmol/L范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)(r)為0.9959～0.9971。 化學(xué)還原體系中5

10、種喹噁啉類脫氧速率比較，為這類藥物脫氧反應(yīng)符合一級動(dòng)力學(xué)規(guī)律提供判斷依據(jù)。酸性碘化鉀還原體系中，5種藥物脫氧還原反應(yīng)近似符合一級化學(xué)動(dòng)力學(xué)規(guī)律，半衰期為4.80～19.06min。堿性連二亞硫酸鈉還原體系中喹噁啉類迅速還原，高效液相色譜測定反應(yīng)體系，由其脫氧還原產(chǎn)物類別推測喹賽多脫氧速率最大，喹烯酮次之。化學(xué)還原體系中5種喹噁啉脫氧速率關(guān)系：喹賽多>卡巴氧>喹烯酮>喹乙醇>乙酰甲喹。 豬肝微粒體中5種喹噁啉類脫氧速率比較，驗(yàn)證喹

11、噁啉類脫氧速率關(guān)系。5種藥物在加有還原型輔酶的豬肝微粒體中孵育，高效液相色譜測定不同時(shí)間原形藥物濃度，發(fā)現(xiàn)其脫氧還原反應(yīng)符合一級化學(xué)動(dòng)力學(xué)規(guī)律，5種藥物的半衰期為11.75～69.31min。脫氧速率喹賽多>喹烯酮>喹乙醇>卡巴氧>乙酰甲喹。 喹噁啉類脫氧速率及毒理學(xué)研究結(jié)果，進(jìn)行脫氧速率與毒性相關(guān)性分析，證明脫氧速率為：喹賽多>喹烯酮>喹乙醇>卡巴氧>乙酰甲喹，速率越大毒性越低，脫氧速率與毒性之間存在負(fù)相關(guān)性，可以作為喹噁啉類