NKX2-5基因突變與室間隔缺損及房間隔缺損關(guān)系研究.pdf

1、研究背景及目的：室間隔缺損（Ventricular Septal Defect，VSD）是最常見的先天性心臟病，總發(fā)病率占先天性心臟病的20％左右，房間隔缺損（Atrial Septal Defect，ASD）的發(fā)病率僅次于室間隔缺損，總發(fā)病率占6-10%。若心房或心室水平持續(xù)存在左向右分流，將引起不可逆的肺動脈高壓（pulmonary hypertension）、心房心室的擴大、心功能衰竭、艾森曼格綜合征（Eisenmenger's

2、Syndrome）、心律失常，甚至猝死，給社會及家庭帶來嚴重的經(jīng)濟負擔。NKX2-5是人類心臟發(fā)育早期最早表達的轉(zhuǎn)錄因子，其突變將導致先天性心臟病及房室傳導阻滯的發(fā)生。本研究以先天性室間隔缺損及房間隔缺損患兒為研究對象，以排除先天性心臟病的外科手術(shù)病人為對照，篩查NKX2-5基因的突變及單核苷酸多態(tài)性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNP），為NKX2-5在室間隔缺損及房間隔缺損中的相關(guān)性提供理論依據(jù)。

3、
　　研究方法：根據(jù)Genbank數(shù)據(jù)庫中NKX2-5序列，發(fā)現(xiàn)NKX2-5除已驗證的3個亞型之外，有一電腦預測亞型，為驗證該亞型在心肌組織中是否表達，取兩名在蘇州大學附屬兒童醫(yī)院心胸外科行心臟外科手術(shù)患兒的病變心肌組織，用 Trizol法提取RNA、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應（Reverse Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）驗證該亞型的表達。同時取抽在蘇州大學附屬兒童醫(yī)院心臟內(nèi)科或心臟外科就診的單純室

4、間隔缺損患兒50名，單純房間隔缺損患兒51名以及50名排除先天性心臟病、血液系統(tǒng)疾病及染色體疾病的外科患兒的外周靜脈血,用DNA試劑盒提取DNA，PCR擴增，DNA測序儀直接測序NKKX2-5外顯子序列，與NCBI中NKX2-5基因序列進行比對，并與對照組比較，觀察該基因突變情況。
　　結(jié)果：
　　1.預測亞型在兩個患兒心肌組織中無表達。
　　2.在一例單純性房間隔缺損患兒中發(fā)現(xiàn)一罕見SNP突變位點（c.104G＞T，

5、rs376790353），該突變位點在其他患兒及對照組中均未發(fā)現(xiàn)。
　　3.在51例單純房間隔缺損，50例單純室間隔缺損及50例對照樣本的外顯子中，均找到已報道的三個常見 SNP（c.63G＞C，rs2277923，c.606A＞G，rs3729753及c.195G>C，rs3131915），在實驗組及對照組中基因型分布及等位基因頻率無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　4.在一例房間隔缺損的患兒外顯子2(NM_004387.