可溶性殼聚糖季銨鹽(CSTM)的合成、表征及其在基因載體和MR分子探針中的應(yīng)用.pdf

1、為篩選具有更佳性能的納米粒載體材料，本課題對天然可生物降解高分子材料--殼聚糖進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，以修飾產(chǎn)物殼聚糖季銨鹽（CSTM）、殼聚糖季銨鹽-g-聚乙二醇-葉酸（CSTM-g-PEG-FA/pDNA）為材料制備了載基因納米粒和CSTM/TPP-SPIO MR分子探針并對其特性進(jìn)行了系列研究。
　　 本課題第一部分完成了殼聚糖季銨鹽和殼聚糖季銨鹽-g-聚乙二醇-葉酸納米材料的制備。首先將殼聚糖與甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化銨反應(yīng)，將

2、殼聚糖修飾成可溶性殼聚糖季銨鹽，然后在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步用葉酸和PEG來修飾殼聚糖季銨鹽得到CSTM-g-PEG-FA。用IR和1H-NMR對聚合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，TM和PEG-FA的特征峰明顯。
　　 本課題第二部分進(jìn)行了殼聚糖季銨鹽-g-聚乙二醇-葉酸載基因納米粒的制備及形態(tài)學(xué)表征。首先采用自組裝法制備了CSTM/pDNA納米復(fù)合物和CSTM-g-PEG-FA/pDNA納米復(fù)合物，然后通過不同介質(zhì)溶液、有無血清、不同N/P等因素對

3、兩納米復(fù)合物的粒徑和zeta電位分別進(jìn)行考察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明在水溶液中能夠得到粒徑在200nm以內(nèi)、粒徑分布均勻、形態(tài)圓整、zeta電位高的納米復(fù)合物。凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)聚合物/pNDA的N/P大于等于5時(shí)，兩種納米復(fù)合物都能完全包裹pNDA，而且兩種殼聚糖衍生物都能很好保護(hù)pNDA不受酶降解。
　　 本課題第三部分從細(xì)胞毒性和轉(zhuǎn)染效率兩個(gè)方面進(jìn)行了兩種納米復(fù)合物的體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。選擇葉酸受體高表達(dá)的293T細(xì)胞株，通過MTT比

4、色法測定兩種殼聚糖衍生物以及兩種納米制劑的細(xì)胞毒性，結(jié)果顯示無論是兩種殼聚糖衍生物還是兩種納米制劑的細(xì)胞存活率均在70％以上，說明合成的CSTM和CSTM-g-PEG-FA材料具有良好的安全性。在細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，CSTM/pDNA納米粒和CSTM-g-PEG-FA/pDNA納米粒都有較高的轉(zhuǎn)染效率，且CSTM-g-PEG-FA/pDNA納米粒的轉(zhuǎn)染效率要高于CSTM/pDNA納米粒，證明CSTM-g-PEG-FA/pDNA納米粒具有一定

5、的細(xì)胞靶向性。
　　 本課題第四部分制備了CSTM/TPP-SPIO分子探針。采用凝聚法制備CSTM/TPP空白納米粒，然后與SPIO結(jié)合生成CSTM/TPP-SPIO分子探針。CSTM/TPP-SPIO分子探針的粒徑在200～280nm之間，zeta電位在10.0～16.0mv之間。SPIO的包封率在80％以上。
　　 本課題第五部分進(jìn)行了CSTM/TPP-SPIO分子探針的體外毒性實(shí)驗(yàn)和動物體內(nèi)淋巴結(jié)病變定性診斷實(shí)驗(yàn)