具有人參皂苷Rb1轉(zhuǎn)化能力菌株的篩選與鑒定.pdf

1、人參皂苷因其糖苷鍵的變化而衍生出很多種類的皂苷，近年來人們越來越重視皂苷成分的藥用價(jià)值，而常見皂苷的轉(zhuǎn)化、生成的稀有皂苷的研究及其生理活性、藥用價(jià)值則更是備受關(guān)注，具有很好的發(fā)展前景。
　　本文選用從泡菜汁中分離出的幾十種微生物菌株來進(jìn)行人參皂苷Rb1的轉(zhuǎn)化，通過與標(biāo)準(zhǔn)品的比對，薄層色譜法（TLC）分析顯示能轉(zhuǎn)化成人參皂苷Rb1為其他稀有皂苷的菌株有13種，本文選取轉(zhuǎn)化能力較強(qiáng)3種菌株進(jìn)行發(fā)酵并對菌株進(jìn)行鑒定。
　　對三種菌

2、株的最佳培養(yǎng)條件和發(fā)酵條件進(jìn)行了探索，培養(yǎng)條件的優(yōu)化利用菌體濃度來表征，而最佳發(fā)酵條件是通過測定酶活力來體現(xiàn)，測定方法是采用了測定β-葡萄糖苷酶的活力的方法，通過測量以pNPG為底物的水解酶分解成pNP及葡萄糖，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：菌株MC02、MC04和DR06的最佳培養(yǎng)條件都是在MRS培養(yǎng)基上，置于37oC恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h~6h，培養(yǎng)基的pH值調(diào)至6.5~8.0；最佳發(fā)酵過程的條件三種菌株在振蕩培養(yǎng)箱中用30oC，反應(yīng)體系pH值在6.

3、0~7.0，酶活力最強(qiáng)的反應(yīng)時(shí)間是72h。
　　利用高效液相色譜法定性分析了各菌株的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。其中菌株MC02在培養(yǎng)24h時(shí)生成人參皂苷Rd和F2，48h后培養(yǎng)液中出現(xiàn)人參皂苷C-K，72h以后完全轉(zhuǎn)化成人參皂苷C-K；菌株MC04在培養(yǎng)24h的菌液能轉(zhuǎn)化人參皂苷Rb1生成人參皂苷Rd和七葉膽苷GXVII，48h后GXVII逐漸消失并伴隨著出現(xiàn)人參皂苷C-K，在72h以后也完全轉(zhuǎn)化為人參皂苷C-K；菌株DR06在24h的時(shí)候生成人

4、參皂苷Rd、七葉膽苷GXVII和人參皂苷F2，48h以后有人參皂苷的C-K的生成，72h以后完全轉(zhuǎn)化生成C-K并沒有其他人參皂苷成分檢出。
　　利用PCR技術(shù)，擴(kuò)增了菌株的16S rRNA，并通過在基因庫進(jìn)行比對初步鑒定出菌株。菌株MC02與 Leuconostoc citreum IH22 AF111949.1菌株相似度為98％；菌株MC04與Leuconostoc mesenteroides FJ655776.1相似度為98%