人參皂苷轉(zhuǎn)化菌株GsBt3的篩選及其轉(zhuǎn)化西洋參總皂苷的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、論文題目:人參皂苷轉(zhuǎn)化菌株G s B t 3 的篩選及其轉(zhuǎn)化西洋參總皂苷的研究學(xué)科專(zhuān)業(yè):微生物學(xué)學(xué)位申請(qǐng)人:鐘雅婷指導(dǎo)教師:袁萍高級(jí)工程師摘要稀有人參皂苷為一類(lèi)部分去除糖配基的人參次生皂苷,具有很強(qiáng)的抗腫瘤活性,但是它們?cè)谔烊蝗藚?、西洋參中的含量非常低甚至根本不存在,只有通過(guò)酸堿水解或微生物轉(zhuǎn)化才能形成。微生物轉(zhuǎn)化人參皂苷以其專(zhuān)一性好、異構(gòu)化衍生物少、產(chǎn)物種類(lèi)較少、收率高等優(yōu)勢(shì)而成為人參皂苷結(jié)構(gòu)改造研究的主要方向。本文從實(shí)驗(yàn)室保藏的人參

2、皂苷轉(zhuǎn)化菌株中篩選出一株G s B t 3 菌株,能夠?qū)⑽餮髤⒖傇碥罩械娜藚⒃碥辙D(zhuǎn)化為小分子的稀有人參皂苷。通過(guò)考察不同展開(kāi)劑的分離效果,優(yōu)選確定了適用于分離分析西洋參總皂苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的T L C 色譜條件,以氯仿.甲醇一水( 4 0 :1 0 :1 ) 組成的展開(kāi)劑進(jìn)行硅膠薄層層析,初步了解西洋參總皂苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中有人參皂苷R d 、R &、R h l 和C .K 等多個(gè)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物形成。經(jīng)過(guò)H P L C 流動(dòng)相梯度的比較研究,建立了定量分

3、析西洋參總皂苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中人參皂苷R g l 、R h l 、R d 、R & 、C —K 的H P L C 方法。色譜條件:色譜柱:W b l c l 啪mC 1 8 柱,( 4 .6 m m ×2 5 0 I 】f l l T l ,5 睥1 ) ;流動(dòng)相:乙腈( A ) - 水( B )梯度洗脫,毗O m i n ,A 2 5 _ ÷4 0 ;2 0 ~ 3 3 m i l l ,A 4 0 —4 6 ;

4、3 3 ~3 7 m i n ,A 4 6 ;3 7 ~ 4 5 m i n ,A 4 6 - ÷5 0 ;4 5 巧2 n l i I l ,A 5 0 一7 0 ;6 2 ~6 5 m i l l ,A 7 0 - ÷9 0 ;柱溫:3 0 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng):2 0 3 姍:流速:1m I /m 碗進(jìn)樣量:1 0 此。在此色譜條件下,線性關(guān)系考察結(jié)果表明,人參皂苷R g l 、R h l 、R d 、R 毋、C -

5、K 分別在0 .7 4 啦7 .4 0 0 、0 .5 3 亂5 .3 6 0 、1 .1 2 8 ~ 1 1 .2 8 0 、O .3 0 8 ~3 .0 8 0 、0 .3 7 亂3 .7 6 0 嵋的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,它們的回歸方程分別為) I = 1 0 4 .1 2 x + 5 8 .7 2 8 ( r = O .9 9 9 9 ) ;) r = 1 1 3 。5 3 x + 1 9 .2 9 6 ( I = O .9

6、9 9 9 ) ;y = 1 4 0 .4 3 x + 3 1 .3 0 8 ( I - = O .9 9 9 9 ) ;y = 6 3 .5 x + 4 .1 2 1 3 ( I = O .9 9 9 9 ) ;y = 8 1 .0 0 4 x + 1 4 .5 9 2( F O .9 9 9 9 ) 。加樣回收率( n = 6 ) 分別為9 7 .1 2 %、9 8 .5 0 %、9 8 .O O %、9 8 .1 2 %和9 6

7、.6 5 %。本法經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證證明簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確、可靠,對(duì)三批西洋參總皂苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的分析結(jié)果表明,西洋參總皂苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中人參皂苷R 9 1 、I 強(qiáng)l 、R d 、R 毋、C - K的含量分別為l O .4 7 %、7 .2 6 %、1 9 .5 1 %、4 .2 0 %和5 .7 8 %。A b s t r a c tR a r e 西船e n o s i d 鸛a r eat y p eo f s e c o n d a r y

8、西衄e 1 1 0 s i d e sw 1 1 i c _ h 酉y c o s y ll i 咎m d Sh a 、,c b e e nr e d u c e d ,u S u a l l yh 撕n gm o r eb i o a c t i V i t i 囂,跚c ! h 笛s 協(xié)o n g e r 孤t i 鈿m o ra c t i 、,i 夠B u tm ec o n t e mo fn l e r a r eg i n

9、 s e n o s i d 錙i n n a t u r a l g i I l s e n g0 rA m 砸c 鋤g 婦饑g i se x 刪y H m e ,o r e v %d o e s n .te X i s t .1 ' I l e r e a r em 優(yōu)w a y t o p r o d u c et l l er a r e 酉l l s e n o s i d e s :A 1 l 湖i I l eh y

10、 d r o l y s i s ,a d dh y d ∞l y s i s 鋤dm i c r o b i a l 仃a I l s f o 姍a t i o n .M i c r o b i a l n 徹s f o 肌a t i o no f 西l l s e n o s i d e S h a v eb e c o m en l e m a i nd i r e c t i o n o f t h er 懿e 疵h ,b e

11、c a 吣eo fi t s a d V a n t a g e s ,S u c h 弱e X e l l e n ts p e c i f i c i 劬l e s si s o m 舐z a t i o nd 西V a t i v e s 鋤d h i 曲e r ) ,i d d .1 1 1 ep 唧o s e o f t l l er e s e 鯽c hi st 0s t l J d yt l l eS 仃a i nG s

12、B t 3刪c h c a l l 缸.肌s 如珊m e 西n S 鉍0 s i d e so f A m e r i c a I l 舀n s e I l g i n t or a r e 百n s e n o s i d e s .A c c o r d i n g t ot h er e S u l to f t l l e i n V e s t i g a t i o no f t h ed e V e l o p i n g

13、 s o l V e I l to f T L C ,w eC h o o s em e b e s tc h r o m a t o 伊a p l l i cc o n d i t i o n s t o s 印a r a t et h e 西n s e l l o s i d e so f A m 嘶c a n西n s e I l 顫c h l o r o f o 鋤:m e l l l a n o l :H 2 0 := 4 0

14、:l 0 :1 , V /v /V ) .T h e r e a r e f i v e p r o d u C t s o ft r a n s f o m a t i o no fA m e r i c a I l 百n s e n gt o t a l s 印o n i n s :百n s e n o s i d eR g l ,R h l ,R d ,R &鋤d C —K . H P L C a 1 1 a l y s

15、i s w 嬲p e r f o 冊(cè)e d o n a W e l c h r o m C 1 8 c o l l l I 】【1 1 1 ( 4 .6m m ×2 5 0 1 1 咖,5 “m ) ;T h e m o b i l ep h a s ew a s a c e t o n i t r i l e ( A ) 一w a t 呱B ) w i mt l l e 乒a d i 饑te l u t i o n ( O

16、一2 0 m i I l ,2 5 %A —÷4 0 %A ;2 0 一3 3 m i n ,4 0 %A —÷4 6 %A ;3 3 —3 7 m i n ,4 6 %A ;3 7 - 4 5 m i n ,4 6 %A —÷5 0 %A ;4 5 ·6 2 m i n ,5 0 %A —÷7 0 %A ;6 2 - 6 5 m i n ,7 0 %A —÷9 0 %A )

17、a t af 1 0 w r a t eo fl m U m i l l ;m et 既r l p e 豫t u ∞o fc o l u m nw 鶴m a i l l t a i l l e d a t3 0 ℃,a 1 1 dt h ed e t e c t i n gw a V e l e I l g t hw 勰s e t a t2 0 3 衄.T h el i n e a r 姍g ew e r e0 .7 4 0 ~ 7 .

18、4 0 0 p g ( 嚴(yán)O .9 9 9 9 ) 矗”昏n s 鉍o s i d eR g l ,0 .5 3 6 ~ 5 .3 6 0 嵋( 嚴(yán)O .9 9 9 9 ) f o r 舀n s e l l o s i d e R h } ,1 .1 2 8 一兒.2 8 0 鷴( 產(chǎn)0 .9 9 9 9 ) f o r 百n s ∞o s i d eR d ,0 .3 0 8 ~ 3 .0 8 0 甥( 產(chǎn)0 .9 9 9 9 ) f

19、 o r 百n s e n o s i d e R & ,0 .3 7 6 ~ 3 .7 6 0 p g ( 嚴(yán)O .9 9 9 9 ) f o rg i l l s e I l o s i d eC - K .T h ea v e r a g er e C o V 舐e s ( n .6 ) o f 6 V ec o m p o n ∞t sw e r e9 7 .1 2 %w i Ⅱ1R S D o f 1 .2 2 %,9

20、 8 .5 0 %w i t hR S D o f O .8 7 %,9 8 .O O %w i t l lR S D o f1 .0 6 %,9 8 .1 2 %w i mR S D o f1 .6 6 %觚d9 6 .6 5 %w i t hR S D o f 1 .4 8 %.T h i sm e m o d i sp r o V e ds i m p l e ,s e l l s i t i V e ,a c c u r a t

21、 ea n dr e l i a b l e .T h e 鋤a 1 ”i cr e s u l to fc o n v e r s i o n p r o d u c t o f A m e r i c 鋤百n s 鋤gt o t a l s a p o n i n s s h o wt h a t ' t l l e a V e r a g ec o n t e n to f 百n s e I l o s i d eR g

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