紅花總黃酮提取純化及體外抗動(dòng)脈粥樣硬化藥效活性評價(jià).pdf

1、目的:本研究以紅花主要有效成分紅花總黃酮為研究對象，考察了其最佳提取純化工藝并進(jìn)行了體外抗動(dòng)脈粥樣硬化藥效活性評價(jià)，為紅花制劑的進(jìn)一步研究和臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　方法:1.提取工藝建立了以蘆丁為對照品的紫外-可見分光光度法和以羥基紅花黃色素A為標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC法相結(jié)合的更適合紅花總黃酮的含量測定方法，以總黃酮提取量為指標(biāo)，探討了不同提取方法對提取效果影響，單因素考察了提取溶劑、提取時(shí)間等因素，并采用正交試驗(yàn)方法考察了不同因素對提

2、取結(jié)果影響，得到了較優(yōu)提取工藝。2.純化工藝以紅花總黃酮吸附率與解析率為指標(biāo)，考察4種不同型號(hào)的大孔樹脂對紅花總黃酮的吸附與解析能力，確定AB-8為最佳樹脂，并對 AB-8大孔樹脂的純化條件進(jìn)行優(yōu)化。3.紅花總黃酮體外藥效試驗(yàn)建立小鼠腹腔巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞模型，用氧化性低密度脂蛋白（ox-LDL）誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞建立泡沫細(xì)胞，膽固醇酯比總膽固醇值大于50％時(shí)說明形成泡沫細(xì)胞，再加入紅花總黃酮高中低藥物組，陽性對照羥基紅花黃色素A組

3、，培養(yǎng)48h，冰浴超聲破碎細(xì)胞用總膽固醇（TC）、游離膽固醇（FC）試劑盒進(jìn)行檢測，觀察其對泡沫細(xì)胞的藥效作用，為紅花總黃酮對早期動(dòng)脈粥樣硬化（AS）作用研究提供一定依據(jù)。
　　結(jié)果：1.含量測定結(jié)果顯示紅花總黃酮在0.0104 mg·mL-1～0.0299 mg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系較好，r=0.9995，平均加樣回收率為104%，RSD為2.82%；羥基黃花黃色素A在5～35μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系較好，r=0.9996

4、，并確定其最佳提取工藝為60倍水在60℃下浸泡提取兩次，每次100min。2.最佳純化工藝為AB-8型大孔樹脂對紅花總黃酮的吸附條件是上樣濃度為0.9 g·mL-1，上樣流速為2 mL·min-1，最佳上樣量為5/8 BV，靜態(tài)吸附時(shí)間為60 min，用7 BV50%乙醇以1 mL·min-1流速的洗脫。3.羥A、紅花中劑量具有明顯的抑制泡沫形成作用（P﹤0.05），且與模型組比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：紅花總黃酮提取純化工藝穩(wěn)