紹興黃酒對(duì)同型半胱氨酸誘導(dǎo)的大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-2表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察紹興黃酒是否能抑制同型半胱氨酸(Hcy)誘導(dǎo)的大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞(VECs)中基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)的表達(dá)和活性并探討其可能的機(jī)制。
　　 方法:大鼠原代主動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)分離培養(yǎng)及純化鑒定后，取第3～4代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。將Hcy(0、50、100、500、1000μmol/L)與血管內(nèi)皮細(xì)胞共同孵育48 h及100μmol/L Hcy與血管內(nèi)皮細(xì)胞共同培養(yǎng)24、48、72 h，分別用熒光定量PCR(FQ-PC

2、R)、免疫印跡法和明膠酶譜法檢測(cè)Hcy對(duì)培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞MMP-2mRNA、蛋白表達(dá)及酶解活性的影響，確定各實(shí)驗(yàn)最佳的Hcy刺激濃度和刺激時(shí)間。每種酒(1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0％)與100μmol/L Hcy共同孵育VECs48 h， MTT法檢測(cè)各酒精度的酒對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞活性的影響，確定各種酒的最佳干預(yù)濃度后，最終干預(yù)組依次分為正常組，Hcy組，Hcy+黃酒組，Hcy+紅葡萄酒組，Hcy+酒精組5組。培養(yǎng)48

3、h后收集各組樣品，F(xiàn)Q-PCR檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞中MMP-2 mRNA水平，免疫印跡法檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞中MMP-2蛋白表達(dá)量，明膠酶譜法測(cè)定血管內(nèi)皮細(xì)胞上清液中MMP-2的酶解活性。
　　 結(jié)果:
　　 1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組MMP-2 mRNA水平
　　 (1)不同濃度Hcy對(duì)VECs MMP-2 mRNA表達(dá)的影響:MMP-2 mRNA表達(dá)在Hcy濃度為50μmol/L、100μmol/L、500μmo

4、l/L、1000μmol/L時(shí)均高于Hcy為0μmol/L(P＜0.01)，當(dāng)Hcy濃度升至500μmol/L時(shí)，MMP-2 mRNA表達(dá)開(kāi)始達(dá)到最高。
　　 (2) Hcy作用不同時(shí)間對(duì)VECs MMP-2 mRNA表達(dá)的影響:MMP-2 mRNA表達(dá)在Hcy(100μmol/L)刺激24 h、48 h、72 h后均高于Hcy刺激0 h(P＜0.01)，且時(shí)間升至48h后達(dá)到最高。
　　 (3)黃酒和紅葡萄酒干預(yù)對(duì)VE

5、Cs MMP-2 mRNA的表達(dá)的影響:與Hcy組相比VECs MMP-2 mRNA表達(dá)黃酒組和紅酒組分別減少了31.1％和34.5％(P＜0.01)，酒精組減少6.5％(P＞0.05);與酒精組比較，黃酒組與紅酒組MMP-2mRNA水平減少差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);黃酒組和紅酒組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 2.免疫印跡法檢測(cè)各組MMP-2蛋白在VECs中的表達(dá)量檢測(cè)蛋白水平可以發(fā)現(xiàn)，Hcy能夠促進(jìn)VE

6、Cs MMP-2的表達(dá)，在一定范圍內(nèi)可呈現(xiàn)濃度與時(shí)間的依賴性。
　　 (1)不同濃度Hcy對(duì)VECs MMP-2蛋白表達(dá)的影響:Hcy在50～500μmol/L可以促進(jìn)MMP-2蛋白表達(dá)上調(diào)，組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 (2)不同作用時(shí)間Hcy對(duì)VECs MMP-2蛋白表達(dá)的影響:Hcy(100μmol/L)干預(yù)24，48，72 h時(shí)，可以發(fā)現(xiàn)其促進(jìn)MMP-2蛋白表達(dá)，以48 h最明顯(

7、P＜0.01)。
　　 (3)黃酒和紅葡萄酒干預(yù)對(duì)VECs MMP-2表達(dá)的影響:相比Hcy組，VECsMMP-2表達(dá)在黃酒組和紅酒組分別下降了29.1％和32.6％(P＜0.05)，酒精組下降5.3％(P＞0.05);相比酒精組，黃酒組與紅酒組MMP-2表達(dá)下降的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);黃酒組與紅酒組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.明膠酶譜法檢測(cè)MMP-2在上清中的酶解活性明膠酶MMP-2在

8、體內(nèi)以酶原的形式進(jìn)行合成與分泌，并在細(xì)胞外進(jìn)行激活。用酶解明膠的量表示MMP-2的酶解活性的強(qiáng)弱，Hcy在50～500μmol/L時(shí)可以增強(qiáng)MMP-2的活性，隨著Hcy濃度增強(qiáng)MMP-2酶解活性增強(qiáng)，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。Hcy（100μmol/L）干預(yù)24，48，72 h，可以發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間增加其促進(jìn)MMP-2活性增強(qiáng)，并以48 h最明顯(P＜0.01)。在最終的黃酒和紅酒干預(yù)組中，與Hcy組相比，MMP-

9、2活性黃酒組和紅酒組分別下降了31.2％和33.8％(P＜0.05)，酒精組下降4.6％(P＞0.05);黃酒組、紅酒組MMP-2活性下降與酒精組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);黃酒組與紅酒組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.Hcy能增強(qiáng)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞MMP-2表達(dá)及酶解活性，在一定范圍內(nèi)隨著Hcy濃度和刺激時(shí)間的增強(qiáng)而增強(qiáng)，可能在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。
　　 2.