共刺激分子ICOS-ICOSL在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者外周血淋巴細(xì)胞的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid arthritis，RA）是累及關(guān)節(jié)滑膜的慢性自身免疫性疾病，以慢性、對(duì)稱性、多滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)。當(dāng)累及關(guān)節(jié)軟骨和骨質(zhì)時(shí)，逐漸形成關(guān)節(jié)畸形和強(qiáng)直，導(dǎo)致關(guān)節(jié)功能喪失，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜至今尚未完全清楚。
　　ICOS/ICOSL是一對(duì)重要的共刺激分子，屬于B7/CD28家族。ICOS分子在活化的T細(xì)胞表面表達(dá)上調(diào)，與其配體ICOSL分子相互結(jié)合后能促進(jìn)T細(xì)胞的活化和增殖，從而在機(jī)

2、體免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。此外，ICOS/ICOSL信號(hào)是B細(xì)胞分化成熟的重要信號(hào)，該信號(hào)的缺乏會(huì)導(dǎo)致機(jī)體T細(xì)胞依賴性的B細(xì)胞反應(yīng)嚴(yán)重受損。
　　目前普遍認(rèn)為，在RA的發(fā)生、發(fā)展過程中，由于T、B細(xì)胞的過度活化使得自身抗體大量合成最終導(dǎo)致全身多個(gè)部位發(fā)生慢性炎癥，鑒于 ICOS/ICOSL信號(hào)誘導(dǎo)活化T淋巴細(xì)胞從而可能參與RA的免疫紊亂和免疫損傷，本文擬檢測(cè)RA病患者外周血淋巴細(xì)胞亞群ICOS/ICOSL分子的異常表達(dá)并分析

3、其臨床意義。
　　【目的】檢測(cè)初發(fā)RA病患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化，同時(shí)檢測(cè)CD4+T細(xì)胞 ICOS的表達(dá)、CD14+單核細(xì)胞和 CD19+B細(xì)胞上 ICOSL的表達(dá)，并探討ICOS/ICOSL與臨床檢測(cè)指標(biāo)的相關(guān)性，進(jìn)一步分析ICOS/ICOSL信號(hào)對(duì)于診斷和治療 RA的潛在臨床意義，探討機(jī)體中該共刺激信號(hào)途徑介導(dǎo)的免疫功能異常在RA發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)作用。
　　【方法】選取RA患者手術(shù)切除的滑膜組織標(biāo)本作為研究對(duì)象，同

4、時(shí)以骨關(guān)節(jié)炎患者（OA）和健康人（NC）的滑膜組織為對(duì)照，運(yùn)用免疫組化的方法檢測(cè)ICOS/ICOSL在RA患者滑膜組織中的表達(dá)特性。此外，選擇85例初發(fā)RA病患者新鮮外周血作為實(shí)驗(yàn)組，同時(shí)選取50例健康人(NC)、30例骨關(guān)節(jié)炎患者（OA）外周血作為對(duì)照組。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) RA患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的異常變化。通過流式細(xì)胞術(shù)和 real-time PCR的方法，從分子和基因兩個(gè)不同水平檢測(cè)ICOS/ICOSL分子在外周血和滑膜液中淋

5、巴細(xì)胞亞群表面的表達(dá)情況。根據(jù)RA臨床病情活動(dòng)性，把初發(fā) RA病患者分為活動(dòng)組和緩解組，用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析不同組間ICOS/ICOSL表達(dá)的差異。選擇15例初診后跟蹤治療RA病患者新鮮外周血作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過上述流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)治療前后RA病患者外周血淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的變化和ICOS/ICOSL在各淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)變化。用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析RA病患者外周血 ICOS/ICOSL的表達(dá)變化及其與臨床檢測(cè)指標(biāo)的相關(guān)性。檢測(cè)數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟

6、件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，組間比較采用t檢驗(yàn)分析，P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。圖表繪制利用GraphPad Prism5.0軟件。
　　【結(jié)果】（1）免疫組織化學(xué)分析結(jié)果顯示，與OA和NC的滑膜組織相比， RA患者滑膜組織可見ICOS/ICOSL分子的陽性表達(dá)。(2)初發(fā)RA患者關(guān)節(jié)腔滑液中CD4+淋巴細(xì)胞上ICOS的表達(dá)和CD14+單核細(xì)胞ICOSL的表達(dá)水平均顯著高于骨關(guān)節(jié)炎患者。（3）real-time PCR結(jié)果顯示，RA

7、患者外周血中ICOS/ICOSL的mRNA的表達(dá)水平均顯著高于OA對(duì)照和健康對(duì)照組。（4）類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者與健康人相比，CD4+T細(xì)胞數(shù)量顯著增加，CD19+B細(xì)胞百分率以及 CD4+CD28-自身反應(yīng)性T細(xì)胞百分率均顯著提高；與OA和NC相比，RA患者CD4+T細(xì)胞上ICOS表達(dá)和CD14+單核細(xì)胞ICOSL呈上調(diào)性表達(dá)，CD19+B細(xì)胞表面ICOSL表達(dá)顯著高于健康對(duì)照組。（5）類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎按病情活動(dòng)性分為急性活動(dòng)期和慢性緩解期

8、，結(jié)果顯示急性活動(dòng)期外周血 CD19+B細(xì)胞百分率顯著高于緩解期患者，且活動(dòng)期RA患者CD14+單核細(xì)胞和CD19+B細(xì)胞表面ICOSL的表達(dá)水平更為顯著；通過收集臨床病理資料并作相關(guān)性分析，顯示 RF陽性的 RA患者CD4+T細(xì)胞表面 ICOS的表達(dá)和 CD19+B細(xì)胞上 ICOSL的表達(dá)均高于 RF陰性患者但與RF的滴度并無顯著相關(guān)性，本研究在與其他臨床檢測(cè)指標(biāo) CRP、抗 CCP、ESR等相關(guān)性分析中發(fā)現(xiàn)，ICOS/ICOSL的表

9、達(dá)與其他指標(biāo)未見相關(guān)性，表明 ICOS/ICOSL與 RA患者的病情活動(dòng)之間無相關(guān)性；與治療前相比，同一患者治療后外周血 CD4+CD28-自身反應(yīng)性T細(xì)胞顯著降低,CD4+T細(xì)胞表面 ICOS的表達(dá)、CD14+單核細(xì)胞表面和 CD19+B細(xì)胞表面 ICOSL的表達(dá)均顯著下調(diào)。
　　【結(jié)論】RA病患者外周血淋巴細(xì)胞亞群存在異常表達(dá)，ICOS/ICOSL分子異常高表達(dá)于RA患者外周血PBMCs的不同亞群表面，且活動(dòng)期與緩解期表達(dá)程度

10、不同，提示ICOS/ICOSL共刺激信號(hào)可能參與RA發(fā)病過程中T、B細(xì)胞的異?；罨约白陨砜贵w的產(chǎn)生，在RA的免疫病理機(jī)制中具有一定意義，檢測(cè)ICOS/ICOSL分子的表達(dá)水平具有臨床意義。治療后 ICOS/ICOSL的表達(dá)水平下降，這進(jìn)一步表明 ICOS/ICOSL信號(hào)可能參與了 RA病免疫病理過程，ICOS/ICOSL的表達(dá)與RA臨床檢測(cè)指標(biāo)基本無相關(guān)性，這表明ICOS/ICOSL可能貫穿 RA疾病的病程始終，但卻不能用來反映 RA