五羥色胺轉運體基因多態(tài)性與氟西汀療效及副作用的關聯(lián)分析.pdf

1、目的：SSRIS類抗抑郁藥物是一類常用的抗抑郁藥物，它通過抑制突觸間隙五羥色胺轉運體(5-HTT)對5-HT的重攝取，從而決定突觸后5-HT受體介導信號的量和作用持續(xù)時間，成為腦內5-HT遞質和外周5-HT效應的微調中心，因此，5-HTT是SSRIS發(fā)揮作用的重要靶標，人類5-HTT基因定位于第17號染色體q11-q12.4區(qū)，該基因第2內含子區(qū)可變數(shù)目串聯(lián)重復序列多態(tài)性(5-HTT-VNTR)，是一個含17bp的短陣串聯(lián)重復序列多態(tài)性

2、，包括10、12個重復的常見序列和9個重復的罕見序列。是SSRIS類抗抑郁藥物發(fā)揮作用時療效和副作用存在個體差異的重要因素。本研究將探討5-HTT第2內含子區(qū)可變數(shù)目串聯(lián)重復序列多態(tài)性(5-HTT-VNTR)與中國漢族人群氟西汀抗抑郁臨床療效及不良反應的相關性。 方法采用隨機調查研究，連續(xù)跟蹤隨訪監(jiān)測的前瞻性研究方法。對符合美國精神疾病分類標準第4版(DSM-Ⅳ)診斷標準，無嚴重軀體疾??；無藥物或酒依賴史，既往無躁狂或輕躁狂發(fā)作

3、史，2004年5月-2005年3月期間到中國醫(yī)科大學門診就診的重度抑郁癥患者82例為研究對象，給予抗抑郁藥物治療(氟西汀)，采用HAMD等心理學量表及TESS副作用量表對患者進行隨訪觀察六周，作為臨床療效及不良反應的評定標準。并于結束時采血，利用聚合酶鏈反應(PCR)多態(tài)性技術檢測5-HTT基因5-HTTVN-TR多態(tài)性，進行基因型分析。用酚-氯仿法從EDTA抗凝血中提取DNA，取500UL血樣，0.2％的鹽水反復清洗離心三次，取沉淀加

4、入STE0.4ml、10mg/ml蛋白酶K5ul、10％SDS溶液25ul，37℃消化過夜。過夜后溶液分別加人飽和酚、酚-氯仿、氯仿，混勻萃取雜質，離心后取水相，加人3M醋酸鈉，再加冰乙醇沉淀DNA，可見白色絮狀DNA團塊，然后再加70％乙醇洗滌，離心后棄上清，自然干燥DNA10min，以100ulTE溶解DNA，-20℃凍存?zhèn)溆?。PCR反應條件為20ul反應體積含有2.0mmoL/LMgcl2、1×TherophilicDNA聚合酶B

5、uffer、引物濃度200nM、200mol/LdNTPs、1UTaqDNA聚合酶0.2ul和約300ng模板基因組DNA。PCR溫度循環(huán)條件為：95℃預變性4min；然后以95℃變性1min、60℃復性45sec、72℃延伸1min，循環(huán)反應35次，最后72℃延伸10min。6％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳。 主要試劑TaqDNA聚合酶、dNTP均購自大連寶生物試劑公司，瓊脂糖及配制聚丙烯酰胺凝膠用丙烯酰胺購自北京華美公司，引物引

6、用自文獻由大連博瑞德試劑公司生物合成。 上游引物序列：5'-GTCAGTATCACAGGCTGCGAG-3'下游引物序列：5'-TGTTCCTAGTCTTACGCCAGTG-3'主要儀器：KUB-OTA7830型低溫離心機(日本久保田公司)；LG15-W型高速臺式離心機(上海醫(yī)用分析儀器廠)；PCR擴增儀(英國Hybaid公司)；FD-201型水平電泳儀(上海醫(yī)用分析儀器廠)；GDS-8000型凝膠成像儀(英國UVP公司)；HH

7、W21CU600型電熱恒溫水溫儀(上海醫(yī)用分析儀器廠)；振蕩混合儀等。將抑郁癥患者根據(jù)氟西汀藥物療效、有無惡心等副作用進行分類，進行關聯(lián)分析。 結果5-HTTVNTR基因型在各組分布頻率均符合Hardy-Weinberg定律；在藥物治療有療效組和無療效組之間5-HTTVNTR等位基因頻率和基因型沒有統(tǒng)計學差異(基因型χ2=0.730，P＞0.05；等位基因頻率X2=0.303，P＞0.05)；有惡心副作用組和無惡心副作用組之間基