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文檔簡介
1、目的:
本研究依據“艾灸治療RA抗炎效應明確,膽堿能抗炎通路對全身和局部炎癥均具有明顯的抑制作用”的基本事實,以針灸理論為指導,艾灸家兔“腎俞”、“足三里”治療實驗性RA,圍繞滑膜炎癥關鍵病理環(huán)節(jié),選擇膽堿能抗炎通路作為研究切入點,以“艾灸刺激—膽堿能抗炎通路—抗炎效應”為研究主線,運用神經阻斷、免疫組化、實時熒光定量 PCR等方法技術,探索膽堿能抗炎通路在艾灸治療RA抗炎效應中的作用機制,對于深化艾灸治療RA的原理研究、豐富
2、灸法的科學內涵具有重要的價值和意義。
方法:
將日本大耳白兔隨機分為正常對照組、RA模型組、艾灸治療組、艾灸治療迷走神經切斷組、艾灸治療假手術組,用福氏完全佐劑塑造RA疾病模型,運用頸部左側迷走神經干切斷術作為干預手段,艾灸“腎俞”、“足三里”治療。1.觀察RA家兔的整體狀況、體重、膝關節(jié)周長、滑膜組織炎癥病理形態(tài);2.采用Elisa法檢測滑膜液中TNF-α、IL-1、IL-6、HMGB1含量;3.采用Elisa法檢
3、測血清中α7nAChR和ChAT的含量;分別采用免疫組化法和實時熒光定量PCR法檢測滑膜組織中α7nAChR、ChAT的蛋白表達和mRNA表達。4.采用免疫組化法檢測滑膜組織中NF-κBp65、NF-κBp50、IκBα、p-IκBα、IKKβ的表達。
結果:
1.艾灸家兔“腎俞”、“足三里”可以明顯改善 RA家兔全身狀況、膝關節(jié)腫脹、關節(jié)滑膜炎癥病理變化,而在切斷迷走神經的情況下其作用顯著降低。
2.滑膜
4、液中細胞因子檢測結果顯示:模型組與正常對照組相比較,RA模型組關節(jié)滑膜液中TNFα、IL-1、IL-6、HMGB1含量顯著增高(P<0.01);與RA模型組比較,艾灸治療組、艾灸治療假手術組關節(jié)滑膜液中 TNFα、IL-1、IL-6、HMGB1含量顯著降低(P<0.01),而艾灸治療迷走神經切斷組無明顯降低((P>0.05);與艾灸治療組比較,艾灸治療迷走神經切斷組滑膜液中TNFα、IL-1、IL-6、HMGB1含量顯著增高(P<0.0
5、1),但艾灸治療假手術組無明顯增高(P>0.05)。
3.α7nAChR、ChAT表達結果顯示:模型組與正常對照組相比較,模型組血清中α7nAChR、ChAT含量、滑膜組織中α7nAChR、ChAT蛋白表達和 mRNA表達均顯著降低(P<0.01);與模型組比較,艾灸組和假手術組血清中α7nAChR、ChAT含量、滑膜組織中α7nAChR、ChAT蛋白表達和 mRNA表達均顯著增高(P<0.01),而艾灸治療迷走神經切斷組無明
6、顯增高(P>0.05);與艾灸組比較,艾灸治療迷走神經切斷組血清中α7nAChR、ChAT含量、滑膜組織中α7nAChR、ChAT蛋白表達和mRNA表達均顯著降低(P<0.01),但假手術組無明顯降低(P>0.05)。
4.①NF-κBp65、NF-κBp50、p-IκBα、IKKβ表達結果顯示:模型組與正常對照組相比較,模型組滑膜組織中 NF-κBp65、NF-κBp50、p-IκBα、IKKβ的表達顯著增高(P<0.01)
7、;與模型組比較,艾灸組和假手術組滑膜組織中 NF-κBp65、NF-κBp50、p-IκBα、IKKβ的表達顯著降低(P<0.01),而艾灸治療迷走神經切斷組無明顯降低(P>0.05);與艾灸組比較,艾灸治療迷走神經切斷組滑膜組織中NF-κBp65、NF-κBp50、p-IκBα、IKKβ的表達顯著增高(P<0.01),但假手術組無明顯增高(P>0.05)。
?、?IκBα表達結果顯示:模型組與正常對照組相比較,模型組滑膜組織中
8、IκBα的表達顯著降低(P<0.01);與模型組比較,艾灸組和假手術組滑膜組織中IκBα的表達顯著增高(P<0.01),而艾灸治療迷走神經切斷組無明顯增高(P>0.05);與艾灸組比較,艾灸治療迷走神經切斷組滑膜組織中 IκBα的表達顯著降低(P<0.01),但假手術組無明顯降低(P>0.05)。
結論:
1.艾灸家兔“腎俞”、“足三里”可以明顯改善實驗性RA家兔全身狀況、膝關節(jié)腫脹、關節(jié)滑膜炎癥病理變化,表明艾灸具
9、有明確的抗炎消腫、抑制滑膜炎癥作用,而在切斷迷走神經的情況下其抗炎作用顯著降低,提示艾灸治療RA的抗炎效應可能與興奮膽堿能抗炎通路密切相關。
2.艾灸家兔“腎俞”、“足三里”可以抑制實驗性RA家兔滑膜液中細胞因子TNF-α、IL-1、IL-6和HMGB1水平,但在切斷迷走神經的情況下其作用顯著下降,提示興奮膽堿能抗炎通路可能是艾灸抑制實驗性RA家兔滑膜細胞分泌促炎細胞因子的重要機制之一。
3.艾灸家兔“腎俞”、“足三
10、里”可以上調α7nAChR、ChAT在RA家兔外周血和滑膜組織中的表達,激活免疫系統(tǒng)的固有膽堿能系統(tǒng),但在切斷迷走神經的情況下其作用顯著降低,提示艾灸可能通過興奮迷走神經釋放 ACh,并與免疫細胞表面的α7nAChR結合,從而激活免疫細胞的固有膽堿能系統(tǒng),轉化為免疫系統(tǒng)內彌散的、持續(xù)的免疫調節(jié)。
4.艾灸家兔“腎俞”、“足三里”可以抑制RA家兔滑膜組織中NF-κBp65、NF-κBp50、p-IκBα、IKKβ的蛋白表達,上調
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