CecropinA-thanatin雜合肽對小鼠生長性能及免疫功能的影響.pdf

1、目的：
　　本研究測定了課題組前期合成、表達的CecropinA-thanatin雜合肽對臨床分離的革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌的體外抑菌活性,并通過動物實驗,對該雜合肽不同劑量、不同給藥途徑對小鼠生長性能及免疫功能的影響進行研究和探討,為該基因工程抗菌肽的臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1、以課題組人工設(shè)計合成的CecropinA-thanatin雜合肽為研究對象,進行大規(guī)模的蛋白表達,對不同批次的表達產(chǎn)物進行混

2、合后測定混合液的MIC,并對臨床分離的革蘭氏陽性菌(金葡菌)和革蘭氏陽性菌陰性菌(大腸桿菌)進行體外抑菌活性的測定;
　　2、選擇3-4周齡、近交系BALB/c小鼠,進行分組、稱重;處理因素分別為高、中、低劑量灌胃抗菌肽,中劑量腹腔注射抗菌肽,中劑量灌胃慶大霉素,空白對照組灌胃pPICZαA空載體轉(zhuǎn)化酵母的上清,各處理方法連續(xù)處理4周;4周后脫臼處死小鼠,稱量體重、脾臟、胸腺;
　　3、腹腔注射2％SRBC免疫小鼠,脫臼處死

3、小鼠后取脾進行脾淋巴增值試驗、抗體細胞生成試驗;
　　4、提前一小時注射5%雞紅細胞,脫臼處死小鼠后吸取腹腔滲出液涂片鏡檢,油鏡下計算巨噬細胞吞噬率、巨噬細胞吞噬指數(shù);
　　5、摘眼球取血后收集血清,ELISA試驗檢測血清中的TNF-α含量;收集小鼠的腸組織標本,進行熒光定量PCR試驗檢測空腸組織中的TNF-α含量。
　　結(jié)果：
　　1、大規(guī)模表達了CecropinA-thanatin雜合肽,經(jīng)測定雜合肽混合液的

4、MIC為0.45×10-3mol/L,經(jīng)體外抑菌活性測定,CecropinA-thanatin雜合肽對革蘭陽性菌(金葡菌)和革蘭氏陰性菌(大腸桿菌)均具有明顯的抑菌活性;
　　2、在不同處理因素的作用下,4周后各組小鼠之間的體重增長率有差別,高劑量CecropinA-thanatin雜合肽灌胃組小鼠的生長性能明顯優(yōu)于其他組小鼠的生長性能;
　　3、檢測各組小鼠的免疫器官指數(shù),在不同處理因素的作用下,4周后各組小鼠之間的脾臟指

5、數(shù)、胸腺指數(shù)有差別,灌胃高劑量CecropinA-thanatin雜合肽可以顯著提高小鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù);
　　4、檢測各組小鼠的脾淋巴細胞增殖能力,在不同處理因素的作用下,4周后各組小鼠之間的脾淋巴細胞刺激指數(shù)有差別,灌胃、腹腔注射中劑量CecropinA-thanatin雜合肽均可以提高小鼠的脾淋巴細胞刺激指數(shù);
　　5、檢測各組小鼠的抗體生成細胞數(shù),在不同處理因素的作用下,4周后各組小鼠之間的抗體生成細胞數(shù)有差別,

6、灌胃中劑量CecropinA-thanatin雜合肽可以提高小鼠的抗體生成細胞數(shù);
　　6、檢測各組小鼠的巨噬細胞吞噬功能,在不同處理因素的作用下,4周后各組小鼠之間的巨噬細胞吞噬率、巨噬細胞吞噬指數(shù)有差別,灌胃中劑量CecropinA-thanatin雜合肽可以顯著提高小鼠的巨噬細胞吞噬功能;
　　7、檢測各組小鼠血清、空腸組織中的TNF-α蛋白水平及mRNA表達水平,在不同處理因素的作用下,4周后各組小鼠之間的TNF-α

7、的濃度及mRNA表達水平有差別,灌胃低劑量CecropinA-thanatin雜合肽、慶大霉素可以顯著提高小鼠的TNF-α的濃度及mRNA表達水平。
　　結(jié)論：
　　大批量的表達了人工合成的CecropinA-thanatin雜合肽,混合液經(jīng)MIC試驗測定其MIC值為0.45×10-3mol/L,體外抑菌實驗證實其對臨床分離的革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌均有抑菌活性;本研究在此研究基礎(chǔ)上對該雜合肽進行動物實驗,驗證其在體內(nèi)的生

8、物功能以及該CecropinA-thanatin雜合肽對小鼠的生長性狀及免疫功能的影響,得出結(jié)論為CecropinA-thanatin雜合肽對小鼠的生長性能有作用,可以提高小鼠的體重增長率;合適的CecropinA-thanatin雜合肽給藥劑量和給藥途徑可以顯著提高小鼠的免疫器官指數(shù),細胞、體液免疫能力,巨噬細胞吞噬能力,以上實驗結(jié)果說明課題組前期設(shè)計、合成、表達的CecropinA-thanatin雜合肽可以提高小鼠的生長性能及免疫