大豆肽的制備及其對小鼠免疫功能的影響.pdf

1、本研究旨在通過自然環(huán)境中篩選出適合豆粕液體發(fā)酵的菌株，通過響應面分析法優(yōu)化大豆肽液體發(fā)酵工藝，提高蛋白質水解度，增加發(fā)酵液中低分子多肽的含量，開拓一條低成本大豆肽生產(chǎn)工藝路線。
　　從湛江自然環(huán)境、生長的植物和動物腸道內容物中采集樣品98份，用平板透明圈法進行初篩，從中分離出117株產(chǎn)蛋白酶的芽孢桿菌，其中有11株的透明圖與菌落直徑比值(H/C)大于5.0；用Folin酚法測定11株芽孢桿菌發(fā)酵液的蛋白酶活力，篩選出菌株y-6產(chǎn)蛋

2、白酶的能力最強，48 h發(fā)酵液中的蛋白酶活力達2852 IU/mL；通過形態(tài)染色特性觀察、生理生化試驗和16S rDNA基因序列分析，鑒定菌株y-6為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)，暫命名為解淀粉芽孢桿菌y-6(Bacillusamyloliquefaciens strainy-6)。
　　將解淀粉芽孢桿菌y-6按4％接種GYP培養(yǎng)基，32℃、180 r/min振蕩發(fā)酵6 h、12 h、18

3、 h、24 h、30 h、36 h、42 h和48 h，4000 r/min離心20 min，取上清液，既為待測粗酶液；對粗酶液進行蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶、甘露聚糖酶、果膠酶等酶活力測定；結果表明：48 h的發(fā)酵液中蛋白酶活力為1072.3 IU/mL，淀粉酶活力為3.75 IU/mL，纖維素酶活力為8.35 IU/mL，甘露聚糖酶活力為565.9 IU/mL，無明顯的果膠酶活性。對發(fā)酵液中蛋白酶的酶學性質進行了研究，結果顯示該蛋白酶

4、為中性蛋白酶，在pH7～7.5有最高的酶活力，最適作用溫度為55℃，40℃以下有較好的溫度穩(wěn)定性；該酶不耐受酸性環(huán)境，pH5以下易失活，pH3環(huán)境下保存1 h檢測不出酶活力；Ca2+、Zn2+及吐溫80對該酶有一定的激活作用，Mn2+、Fe3+、Cu2+及EDTA對酶有一定的抑制作用。
　　采用Minitab15.1版軟件安排試驗設計及試驗結果統(tǒng)計分析，對解淀粉芽孢桿菌y-6發(fā)酵低溫豆粕制備大豆肽的工藝進行了研究；采用Plaeke

5、tt-Burman試驗設計對pH值、接種量、搖床轉速、溫度、裝液量共5個因素的主效應及交互作用進行考察，確定了接種量、溫度、搖床轉速三個重要影響因素；利用Box-Behnken中心組合設計出15個試驗的響應面分析試驗，對接種量、溫度、搖床轉速三個因素做進一步的參數(shù)選擇優(yōu)化；優(yōu)化后的參數(shù)為：接種量6.3％，發(fā)酵溫度為39.89℃，搖床轉速為187r/min，優(yōu)化參數(shù)后所得試驗結果與回歸模型預測吻合較好，說明所建立的回歸模型是可靠的，可以較

6、準確地預測出大豆肽轉化率；優(yōu)化發(fā)酵參數(shù)后，大豆肽的轉化率由最初的63.7％提高到78.15％。
　　將120只小鼠隨機分成三批，每批四組，每組10只；對照組飼喂基礎日糧，三個試驗組分別在基礎日糧中添加1％、2％、4％的自制大豆肽，飼喂小鼠21 d后，測定免疫器官指數(shù)、血清溶菌酶、巨噬細胞吞噬功能和血清溶血素；結果表明：大豆肽可以顯著提高小鼠免疫器官指數(shù)，增強小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬活性，激發(fā)小鼠抗雞紅細胞抗體的產(chǎn)生，而血清溶菌酶活性