酪蛋白糖巨肽的分離純化及其對(duì)小鼠免疫功能影響的研究.pdf

1、酪蛋白糖巨肽(Casein Glycomacropcptide，CGMP)是乳清蛋白的重要組成部分，具有獨(dú)特的氨基酸組成，它幾乎不含有芳香族氨基酸，且富含支鏈氨基酸。其主要生物活性有促雙歧桿菌增殖，抑制胃液的分泌，防止毒素、細(xì)菌和病毒的侵害以及調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等。因此，CGMP可作為功能性食品的重要原料。
　　 本課題以實(shí)驗(yàn)室自制干酪乳清為原料，通過(guò)鹽析條件的選擇，以及對(duì)超濾溫度、壓力和時(shí)間等條件的控制，找到最佳的CGMP的粗提工藝

2、參數(shù)。實(shí)驗(yàn)表明，采用硫酸銨終濃度為20％進(jìn)行鹽析時(shí)，上清液中唾液酸含量最高，達(dá)到993.16mg/L；超濾最佳工藝條件為壓力：0.2MPa，溫度45℃，35min作為一個(gè)超濾周期；采用D201GF樹(shù)脂對(duì)超濾后蛋白混合物進(jìn)行純化，離子交換層析選擇含0.4mol/L NaCl的20mmol/LTris-HCl緩沖液進(jìn)行洗脫，經(jīng)凍干后獲得成品。用紫外測(cè)定法進(jìn)行純度檢測(cè)，純度達(dá)到83.97％，純化效果明顯；SDS-PAGE電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CG

3、MP的分子量約為16000Da。
　　 用CGMP對(duì)BALB/c小鼠進(jìn)行灌胃后，測(cè)定免疫指標(biāo)。免疫器官指數(shù)試驗(yàn)結(jié)果表明CGMP能提高小鼠的脾臟指數(shù)，激活脾細(xì)胞的活性功能；MTT比色法考察CGMP對(duì)BALB/c小鼠免疫系統(tǒng)的影響，分別測(cè)量ConA和LPS刺激下小鼠脾細(xì)胞增殖情況，發(fā)現(xiàn)CGMP能夠不同程度的提高小鼠B淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)，CGMP各劑量組均顯著優(yōu)于日食組和乳清組。巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)表明CGMP能提高巨噬細(xì)胞吞噬雞紅