不同應(yīng)激對(duì)小鼠免疫防御功能的影響及其分子免疫學(xué)基礎(chǔ).pdf

1、研究表明應(yīng)激能夠影響動(dòng)物和人體的免疫功能，機(jī)體免疫系統(tǒng)功能的紊亂是感染性疾病、腫瘤等發(fā)生或惡化的直接原因，故闡明應(yīng)激對(duì)免疫系統(tǒng)損傷的作用機(jī)制具有重要意義。動(dòng)物模型具有資源相對(duì)易獲得、操作性強(qiáng)、涉及倫理道德問(wèn)題相對(duì)較少等優(yōu)點(diǎn)，因此建立理想的應(yīng)激動(dòng)物模型是研究得以深入的關(guān)鍵。我們應(yīng)用束縛應(yīng)激和熱應(yīng)激建立了兩種小鼠應(yīng)激動(dòng)物模型，然后使小鼠染菌，通過(guò)比較應(yīng)激狀態(tài)下小鼠與正常小鼠的死亡率來(lái)研究?jī)煞N應(yīng)激對(duì)小鼠免疫防御功能的影響，并試圖從遺傳背景角度

2、揭示基因多態(tài)性與應(yīng)激狀態(tài)下免疫應(yīng)答強(qiáng)度的關(guān)系；通過(guò)應(yīng)激所導(dǎo)致的機(jī)體免疫器官損傷、血清中蛋白質(zhì)的變化及全血中金屬元素含量的變化幾個(gè)方面來(lái)揭示應(yīng)激對(duì)免疫防御功能影響的相關(guān)機(jī)制。 方法應(yīng)用束縛應(yīng)激和熱應(yīng)激建立了兩種小鼠應(yīng)激動(dòng)物模型，然后使小鼠染菌，研究這兩種應(yīng)激對(duì)小鼠免疫防御功能影響，并通過(guò)以下幾個(gè)方面來(lái)研究應(yīng)激對(duì)免疫功能損傷的可能機(jī)制。 1.研究應(yīng)激對(duì)小鼠脾臟重量指數(shù)的影響，觀察接受應(yīng)激的小鼠脾臟的病理變化，闡述免疫防御功能

3、降低的構(gòu)效關(guān)系。 2.以已經(jīng)建立的動(dòng)物模型為研究對(duì)象，采用PCR技術(shù)檢測(cè)以MudoEb5和MudoEb7為代表的小鼠H2-Eb位點(diǎn)等位基因的多態(tài)性，從遺傳多樣性的角度揭示基因多態(tài)性與應(yīng)激狀態(tài)下免疫應(yīng)答強(qiáng)度的關(guān)系。 3.采用SELDI-TOF-MS技術(shù)，運(yùn)用弱陽(yáng)離子交換芯片(WCX2)對(duì)小鼠血清蛋白質(zhì)指紋圖譜進(jìn)行研究，探索不同類型的應(yīng)激對(duì)免疫功能影響的特點(diǎn)及物質(zhì)基礎(chǔ)。 4.采用原子吸收分光光度法檢測(cè)小鼠全血中鐵、鋅

4、、鈣、鎂四種元素含量，以揭示應(yīng)激過(guò)程中四種元素的代謝變化規(guī)律，探索應(yīng)激對(duì)免疫功能損傷的相關(guān)機(jī)制。 結(jié)果1.注射大腸埃希菌后束縛應(yīng)激組和熱應(yīng)激組小鼠死亡率顯著高于正常對(duì)照組小鼠(P＜0.01)，束縛應(yīng)激組和熱應(yīng)激組小鼠死亡率無(wú)明顯差異(P＞0.05)。 2.束縛應(yīng)激組、熱應(yīng)激組小鼠脾臟重量指數(shù)較正常對(duì)照組明顯減小(P＜0.01)，但兩個(gè)應(yīng)激組間無(wú)明顯差異(P＞0.05)。正常對(duì)照組小鼠脾臟白、紅髓結(jié)構(gòu)清楚，比例適中，脾小體

5、清晰可見(jiàn)，脾索中含有較多的淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞；束縛應(yīng)激組和熱應(yīng)激組小鼠脾臟切片病理學(xué)改變相似，白髓比例減小、紅髓比例增大，脾小體有不同程度的縮小、分布及結(jié)構(gòu)不規(guī)則。 3.PCR結(jié)果：126只小鼠中，MudoEb5檢測(cè)陽(yáng)性的有91只(72.22﹪)，MudoEb7檢測(cè)陽(yáng)性的有75只(59.52﹪)。正常對(duì)照組小鼠MudoEb5和MudoEb7基因型與小鼠接受細(xì)菌攻擊后生存狀態(tài)間無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)；應(yīng)激組小鼠中除熱應(yīng)激組小

6、鼠MudoEb5基因型與小鼠接受細(xì)菌攻擊后生存狀態(tài)間存在明顯相關(guān)性(P＜0.05)外，其它均無(wú)明顯相關(guān)性。MudoEb5和MudoEb7交互作用對(duì)各組小鼠接受細(xì)菌攻擊后生存狀態(tài)的影響分析，結(jié)果表明在對(duì)小鼠免疫防御功能影響方面MudoEb5和MudoEb7之間不存在交互作用(P＞0.05)。 4.血清中檢測(cè)到的蛋白質(zhì)質(zhì)荷比(m/z)主要在1500～50000D范圍內(nèi)，尤其集中在2000～20000D范圍內(nèi)。三組共檢測(cè)出256個(gè)蛋白

7、質(zhì)峰，將正常對(duì)照組、束縛應(yīng)激組和熱應(yīng)激組三組同時(shí)進(jìn)行比較，其中有45個(gè)蛋白質(zhì)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。束縛應(yīng)激組與正常對(duì)照組間有33個(gè)蛋白質(zhì)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，與正常對(duì)照組比較，束縛應(yīng)激組蛋白相對(duì)含量高的有17個(gè)峰，熱應(yīng)激組與正常對(duì)照組間有31個(gè)蛋白質(zhì)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，與正常對(duì)照組相比，熱應(yīng)激組蛋白相對(duì)含量高的有13個(gè)峰。經(jīng)主觀判定，束縛應(yīng)激組的典型差異峰的數(shù)量為9個(gè)，熱應(yīng)激組為11個(gè)。在束縛應(yīng)激組

8、與正常對(duì)照組間的9個(gè)典型差異峰中，束縛應(yīng)激組蛋白質(zhì)荷比為2871、3457、3682、3830、8029和11750六個(gè)蛋白的相對(duì)含量均明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.005)，而熱應(yīng)激組相應(yīng)蛋白與正常對(duì)照組相比沒(méi)有明顯差異(P＞0.01)，束縛應(yīng)激組蛋白質(zhì)荷比為5342，5526，6114三個(gè)蛋白的相對(duì)含量均明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.005)，熱應(yīng)激組相應(yīng)蛋白與正常對(duì)照組相比，除蛋白質(zhì)荷比為6114的蛋白無(wú)明顯差異外(P＞0.01)，其

9、它兩個(gè)蛋白相對(duì)含量均明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.005)，在上述9個(gè)典型差異峰中，蛋白質(zhì)荷比為2871、3457、3682和8029四個(gè)蛋白的相對(duì)含量在束縛應(yīng)激組與熱應(yīng)激組間均有明顯差異(P＜0.01)；在熱應(yīng)激組與正常對(duì)照組間的11個(gè)典型差異峰中，熱應(yīng)激組蛋白質(zhì)荷比為7500、7600、78¨、7857、15598、15705和15812七種蛋白的相對(duì)含量均明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.005)，而束縛應(yīng)激組相應(yīng)蛋白與正常對(duì)照組相比除蛋

10、白質(zhì)荷比為7600的蛋白相對(duì)含量明顯高于正常對(duì)照組外(P＜0.005)，其它蛋白與正常對(duì)照組相比均無(wú)明顯差異(P＞0.01)，熱應(yīng)激組蛋白質(zhì)荷比為4227，4261，4389，4424四個(gè)蛋白峰的相對(duì)含量均明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.005)，束縛應(yīng)激組相應(yīng)蛋白與正常對(duì)照組相比，除蛋白質(zhì)荷比為4389蛋白相對(duì)含量明顯低于正常對(duì)照組外(P＜0.01)，其它三個(gè)蛋白相對(duì)含量與正常對(duì)照組相比均無(wú)明顯差異(P＞0.01)，在上述11個(gè)典型差異峰

11、中，蛋白質(zhì)荷比為4227、4261、7500、7600和7811五個(gè)蛋白的相對(duì)含量在熱應(yīng)激組與束縛應(yīng)激組間均有明顯差異(P＜0.01)。 5.束縛應(yīng)激組小鼠鐵、鋅元素含量均顯著低于正常對(duì)照組和熱應(yīng)激組(P＜0.01)，熱應(yīng)激組小鼠鐵、鋅元素含量與正常對(duì)照組相比均無(wú)明顯差異(P＞0.05)。束縛應(yīng)激組小鼠鈣元素含量顯著高于正常對(duì)照組和熱應(yīng)激組(P＜0.01)，熱應(yīng)激組小鼠鈣元素含量與正常對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(P＞0.05)。束縛應(yīng)

12、激組和熱應(yīng)激組小鼠鎂元素含量明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.05)。除束縛應(yīng)激組小鼠鐵與鋅含量有顯著相關(guān)性外(P＜0.01)，其它組小鼠鐵與鋅含量均無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)。 結(jié)論1.本實(shí)驗(yàn)采用的束縛應(yīng)激和熱應(yīng)激均降低了機(jī)體的免疫功能，動(dòng)物模型有效。并且這兩種應(yīng)激刺激對(duì)小鼠免疫防御功能損傷的程度相當(dāng)。 2.本實(shí)驗(yàn)采用的兩種應(yīng)激均損傷了與小鼠免疫有關(guān)的物質(zhì)結(jié)構(gòu)，使小鼠的免疫功能發(fā)生了變化，其免疫功能的變化有構(gòu)效基礎(chǔ)，進(jìn)一步

13、說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)建立的兩種應(yīng)激導(dǎo)致小鼠免疫功能降低的動(dòng)物模型有效。 3.MudoEb5可能參與了熱應(yīng)激狀態(tài)下的免疫調(diào)節(jié)，而MudoEb7可能對(duì)免疫調(diào)節(jié)的作用不大，兩種基因與束縛應(yīng)激狀態(tài)下的免疫應(yīng)答間的關(guān)系不大。 4.兩種應(yīng)激均可引起小鼠血清蛋白的變化，但兩種應(yīng)激引起小鼠血清蛋白差異是不同的，即兩種應(yīng)激導(dǎo)致免疫防御功能降低的物質(zhì)基礎(chǔ)可能不同。 5.束縛應(yīng)激可以導(dǎo)致小鼠全血中鐵、鋅元素含量降低，而熱應(yīng)激對(duì)全血中鐵、鋅元素含