Galectin-1在胰腺星狀細(xì)胞致胰島β細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、目的：既往研究證實(shí)胰島纖維化是2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）常見(jiàn)病理特征之一。業(yè)已明確胰腺星狀細(xì)胞（pancreatic stellate cell，PSC）是胰腺纖維化進(jìn)程中的主要效應(yīng)細(xì)胞。前期研究發(fā)現(xiàn)活化PSC可抑制胰島β細(xì)胞增殖，促進(jìn)其凋亡。在活化PSC分泌的多種產(chǎn)物中，galectin-1（Gal-1）對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。本研究擬探討Gal-1在PSC促進(jìn)胰島β細(xì)胞凋

2、亡及影響胰島β細(xì)胞胰島素分泌過(guò)程中的作用。 方法： 1、運(yùn)用Western blot檢測(cè)活化PSC胞內(nèi)Gal-1的表達(dá)及培養(yǎng)上清中Gal-1的分泌；通過(guò)免疫熒光染色進(jìn)一步證實(shí)活化PSC表達(dá)Gal-1。 2、提取胰腺星狀細(xì)胞上清（pancreatic stellate cell-supernatants，PSC-SN），采用50％ PSC-SN干預(yù)Ins-1，并使用20mM Thidigalactoside （TD

3、G）阻斷PSC-SN中Gal-1的作用，電化學(xué)發(fā)光免疫分析法（electrochemiluminescent immunoassay，ECLIA）檢測(cè)干預(yù)24小時(shí)上清中胰島素水平；Annexin Ⅴ-PI標(biāo)記后行流式細(xì)胞術(shù)分析，檢測(cè)干預(yù)24小時(shí)Ins-1的凋亡水平。 3、采用人重組Gal-1（human recombined galectin-1），分別以0、0．2μg/ml、1．0μg/ml、5．0μg/ml濃度直接干預(yù)體外培

4、養(yǎng)的Ins-1，ECLIA分析Gal-1干預(yù)Ins-1 24小時(shí)后上清中胰島素水平；運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度人重組Gal-1干預(yù)24小時(shí)對(duì)Ins-1凋亡的影響。 結(jié)果： 1、Western blot檢測(cè)到活化PSC胞內(nèi)表達(dá)Gal-1；培養(yǎng)上清中亦存在Gal-1；細(xì)胞免疫熒光染色同樣觀察到，活化PSC大量表達(dá)Gal-1。 2、50％ PSC-SN干預(yù)Ins-1 24小時(shí)后，上清中胰島素量顯著減少（P< 0．01）

5、，該作用可被20mM TDG部分阻斷（P<0．01），而20mM TDG對(duì)Ins-1凋亡及胰島素分泌并無(wú)影響（P>0．05）；Annexin Ⅴ-PI標(biāo)記后流式細(xì)胞儀分析示50％ PSC-SN誘導(dǎo)Ins-1凋亡率增加（P<0．01），該作用可被TDG部分抑制（P<0．01）。 3、不同濃度人重組Gal-1干預(yù)24小時(shí)呈濃度依賴性促進(jìn)Ins-1凋亡（P<0．01）；抑制Ins-1胰島素表達(dá)分泌（P<0．01）。 結(jié)論：Ga