海洋微生物抗腫瘤活性產(chǎn)物的篩選、菌種鑒定及產(chǎn)物的初步研究.pdf

1、根據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì),癌癥現(xiàn)在仍然是威脅人類健康的第一大殺手。雖然現(xiàn)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已經(jīng)開發(fā)研制出了許多抗癌類新藥,但是它們都存在選擇性差、毒副作用大等缺陷。因此,加快速度研制高效低毒的抗癌類新藥成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域里亟待突破的目標(biāo)。對(duì)于抗腫瘤藥物的研究,從自然界中開發(fā)抗腫瘤藥物一直是抗腫瘤領(lǐng)域的熱點(diǎn),而且,微生物和其代謝產(chǎn)物因其多樣性,長(zhǎng)期以來(lái)也被受國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者重視。然而,在長(zhǎng)達(dá)幾十年的藥物篩選過程中,從陸生微生物找到新型活性物質(zhì)的難度越來(lái)越大。

2、因此,近年有越來(lái)越多的研究人員將目標(biāo)轉(zhuǎn)向了區(qū)別于陸地的海洋微生物資源。海洋環(huán)境有著和陸地相差巨大的自然環(huán)境,在這樣的自然環(huán)境下存活的微生物也有著獨(dú)特的代謝機(jī)制,這也促成了其代謝產(chǎn)物的多樣性。這也成為從海洋微生物及其代謝產(chǎn)物中篩選出具有抗腫瘤新型化合物提供了極大地可能性。如今,已從海洋資微生物中得到了許多新型的抗腫瘤天然產(chǎn)物,并證實(shí)了它們優(yōu)越的抗腫瘤活性,這也為抗腫瘤藥物的研發(fā)提供了豐富的多樣性。
　　近年來(lái),肝癌的發(fā)病率不斷增加。

3、在我國(guó),肝癌發(fā)病率和死亡率位居全球首位,被稱為“癌中之王”。因此,篩選肝癌藥物先導(dǎo)化合物具有重要意義。
　　本研究從5株海洋微生物中篩選到2株代謝產(chǎn)物具有抗腫瘤活性的菌株 S-1和N16,對(duì)菌株S-1和N16進(jìn)行了菌種鑒定;并從海洋微生物S-1代謝產(chǎn)物中純化出了一種具有抗腫瘤活性的多肽類化合物,并對(duì)其活性進(jìn)行了初步的研究。主要內(nèi)容包括:
　　1、采用MTT活性跟蹤法,以BEL-7402、RKO、A549、U251和MCF-7

4、等細(xì)胞系為模型,對(duì)5株海洋微生物的代謝產(chǎn)物進(jìn)行抗腫瘤活性的篩選。結(jié)果表明:菌株S-1和N16代謝產(chǎn)物具有較好的抗腫瘤活性,菌株S-1代謝產(chǎn)物對(duì)MCF-7、U251和BEL-7402三種腫瘤細(xì)胞的IC50值分別為44μg?mL-1、102μg?mL-1和82μg?mL-1;菌株N16代謝產(chǎn)物對(duì)MCF-7和BEL-7402兩種腫瘤細(xì)胞的IC50值分別為84μg?mL-1和133μg?mL-1。通過對(duì)菌株S-1和N16的16S rDNA序列測(cè)

5、定、同源性比對(duì)分析及生理生化特征研究,確定菌株S-1為短芽孢桿菌屬(Brevibacillus sp.), N16為芽孢桿菌屬(Bacillus sp.)。
　　2、采用MTT活性追蹤法,通過水飽和正丁醇萃取法、CM Sepharose Fast Flow陽(yáng)離子交換色譜法和制備型C18 HPLC反相色譜法等分離手段進(jìn)一步從菌株S-1代謝產(chǎn)物中分離純化出一種能抑制腫瘤細(xì)胞增殖的多肽,命名為SBP(Peptide from Brevi

6、bacillus sp. S-1,SBP);采用質(zhì)譜技術(shù)對(duì)SBP的分子量進(jìn)行測(cè)定,其分子量為1570 Da。
　　3、采用MTT法測(cè)定了抗腫瘤多肽S BP對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402的抑制作用,結(jié)果顯示:陽(yáng)性對(duì)照絲裂霉素對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402的IC50值為1.44μM,SBP對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402的IC50值為7.15μM;通過倒置相差顯微鏡觀察活性多肽SBP作用后肝癌細(xì)胞BEL-7402的細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果顯示:SBP能