大鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型的建立及血漿激肽釋放酶在其發(fā)病中的作用.pdf

1、第一部分，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠模型的建立和評(píng)價(jià)
　　 目的：研究建立一種簡便、有效、實(shí)用的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠模型，并從多方面進(jìn)行評(píng)價(jià)，為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制及有效治療藥物的深入研究提供可靠的動(dòng)物模型。
　　 方法：雌性Lewis大鼠，6-8周齡，20只，隨機(jī)分為兩組，正常對照組8只，模型組12只。模型組大鼠尾根部皮下注射牛II型膠原和弗氏完全佐劑混合乳劑，誘導(dǎo)Lewis大鼠產(chǎn)生關(guān)節(jié)炎。實(shí)驗(yàn)期間，觀察大鼠的一般情況；記錄大

2、鼠體重及踝關(guān)節(jié)直徑變化；初次免疫后1周、2周、3周、4周對實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分；初次免疫、初次免疫后4周、初次免疫后12周對實(shí)驗(yàn)大鼠行X線攝片；初次免疫、初次免疫后2周、3周、4周對實(shí)驗(yàn)大鼠行踝關(guān)節(jié)MRI檢查；初次免疫、初次免疫后2周、3周、4周、12周取模型組大鼠踝關(guān)節(jié)行組織切片HE染色；初次免疫后3周，實(shí)驗(yàn)大鼠眼眶取血，分離血清，ELISA法檢測血清中TNF-a、IL-1β的水平；初次免疫后11天，實(shí)驗(yàn)大鼠眼眶取血，分離血清，

3、大鼠細(xì)胞因子蛋白芯片試劑盒(RatCytokine Array Panel Array Kit)檢測大鼠血清中細(xì)胞因子的變化。
　　 結(jié)果：正常對照組大鼠生長迅速，踝關(guān)節(jié)無腫脹。模型組大鼠生長緩慢，初次免疫后12天模型組大鼠踝關(guān)節(jié)陸續(xù)出現(xiàn)紅腫，21天左右關(guān)節(jié)腫脹達(dá)到高峰，關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分較正常組明顯升高。踝關(guān)節(jié)X線片、MRI及組織病理學(xué)檢查均顯示模型組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織、軟骨組織及骨組織呈典型的關(guān)節(jié)炎病變。ELISA檢測結(jié)果顯示模型

4、組大鼠TNF-a、IL-1β水平較正常對照組大鼠明顯升高(P＜0.05)。細(xì)胞因子蛋白芯片檢測結(jié)果顯示模型組大鼠多種炎癥趨化因子表達(dá)增高。
　　 結(jié)論：1．牛II型膠原混合完全佐劑免疫Lewis大鼠誘導(dǎo)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法可靠、模型穩(wěn)定性好、Lewis大鼠發(fā)病率高。2．膠原誘導(dǎo)的大鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型(CIA)和人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的病理特點(diǎn)和臨床特征極其類似，可應(yīng)用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制及抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物療效評(píng)價(jià)及

5、作用機(jī)制的研究。
　　 第二部分,血漿激肽釋放酶在CIA大鼠發(fā)病中的作用
　　 目的:研究血漿激肽釋放酶在CIA大鼠發(fā)病中的作用及其作用機(jī)制。
　　 方法:按第一部分所述方法建立CIA大鼠模型，并使用血漿激肽釋放酶的抑制劑EPI-KAL-2、13G11進(jìn)行干預(yù)治療。實(shí)驗(yàn)期間觀察大鼠的一般情況，記錄踝關(guān)節(jié)直徑變化；初次免疫后1周、2周、3周、4周對各組大鼠行關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分；初次免疫后4周，實(shí)驗(yàn)大鼠眼眶取血，ELIS

6、A法檢測血清中炎癥因子TNF-a、IL-1β及補(bǔ)體C3a、C5a的水平。
　　 結(jié)果:正常大鼠生長迅速，踝關(guān)節(jié)無腫脹，模型組大鼠生長緩慢，踝關(guān)節(jié)腫脹明顯，EPI-KAL-2和13G11治療組大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹程度較模型組明顯減輕。初次免疫后2周、3周、4周時(shí)，EPI-KAL-2和13G11治療組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分明顯低于PBS治療組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ELISA檢測結(jié)果顯示PBS治療組和13G11治療組大鼠血清中TNF-a、IL-

7、1β水平均較正常對照組大鼠明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。13G11治療組大鼠血清TNF-a、IL-1β水平較PBS治療組低，但二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。正常對照組、PBS治療組、13G11治療組，三組間C3a水平無明顯差異，13G11治療組C5a水平較PBS治療組明顯降低，兩者間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，13G11治療組C5a水平同正常對照組相比無明顯差異。
　　 結(jié)論:1．血漿激肽釋放酶的抑制劑EPI-KAL-2、13G11可以明顯抑制