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文檔簡介
1、傳統(tǒng)的微生物純培養(yǎng)技術(shù)能夠分離得到的微生物僅為自然界中微生物總數(shù)的1%左右,絕大多數(shù)微生物還處于未培養(yǎng)和未研究狀態(tài),針對新型培養(yǎng)技術(shù)的探索已經(jīng)成為了研究熱點。本論文在傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)技術(shù)的基礎(chǔ)上進行改進,對泉州灣灘涂蝦池表層沉積物中的細菌進行富集培養(yǎng),并運用變性梯度凝膠電泳(DGGE)技術(shù)對培養(yǎng)后的細菌多樣性變化進行比較和研究;同時,對蝦池表層沉積物樣品總DNA以及多種固體培養(yǎng)基富集后培養(yǎng)物的總DNA的DGGE圖譜中16SrDNA片段的顯
2、著條帶進行切割、克隆和測序,并進行系統(tǒng)發(fā)育分析。本研究取得了以下主要結(jié)果: 1.對蝦池表層沉積物細菌多樣性進行分析,得出該沉積環(huán)境細菌多樣性指數(shù)為3.4971,豐度為41,均勻度指數(shù)為0.94171;對DGGE圖譜上的特征條帶進行切割回收和克隆測序后得到了優(yōu)勢菌的信息。測序結(jié)果為:17個優(yōu)勢條帶分別屬于變形菌門、α-變形菌綱、γ-變形菌綱、δ-變形菌綱、ε-變形菌綱、綠彎菌門、放線菌門、厚壁菌門、擬桿菌門和環(huán)境樣品中的未知菌群等
3、10個類群,其中有15個條帶的序列與各個門類中未培養(yǎng)細菌具有大于98%的同源性。 2.采用直接接種(Ⅰ)和稀釋接種(Ⅱ)等2種接種方式、勻速搖動(Y)和間歇擾動(R)等2種培養(yǎng)方式以及2216E、D2216E、VL55、DNB、HM1、HM2、DR2A和R2A等8種液體培養(yǎng)基對蝦池表層沉積物細菌進行為期2周的富集培養(yǎng),結(jié)合各樣品的DGGE圖譜和細菌多樣性指數(shù),對接種方式、培養(yǎng)方式的改進效果和各種培養(yǎng)基的使用效果做出評價,結(jié)果表明
4、:Ⅰ Y和Ⅱ R方式可以適用于大多數(shù)液體培養(yǎng)基,低營養(yǎng)基質(zhì)培養(yǎng)基比高營養(yǎng)基質(zhì)培養(yǎng)基更能獲得較多的DGGE條帶和較高細菌多樣性。 3.采用A2216E、AD2216E、AVL55、ADNB、AHM1、AHM2、ADR2A、AR2A和G2216E、GD2216E、GVL55、GDNB、GHM1、GHM2、GDR2A、GR2A等16種固體培養(yǎng)基對蝦池表層沉積物細菌進行為期12周以上的富集培養(yǎng),菌落計數(shù)結(jié)果顯示:AVL55、GVL55、
5、GDNB、GHM2和GDR2A等培養(yǎng)基在2周和12周的菌落計數(shù)結(jié)果還有明顯的增長;將2周富集培養(yǎng)物DGGE圖譜中的顯著條帶進行切割回收和克隆測序,得到培養(yǎng)后的優(yōu)勢菌落信息。測序結(jié)果為:19個顯著條帶分別屬于γ-變形菌綱、α-變形菌綱、ε-變形菌綱、厚壁菌門、海洋細菌和環(huán)境樣品中的未知菌群等6個類群,其中有9個條帶的序列與各門類中未培養(yǎng)細菌具有大于98%的同源性。 4.成功的將新型微生物胞外多糖——結(jié)冷膠(Gellan gum)應(yīng)
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