對蝦養(yǎng)殖環(huán)境微生物多樣性分析和微生態(tài)制劑的研究與應(yīng)用.pdf

1、本論文針對水產(chǎn)養(yǎng)殖現(xiàn)行使用的微生物制劑作用時效短，在使用過程中優(yōu)勢地位不明顯等缺陷，基于微生態(tài)理論和芽孢桿菌作為微生態(tài)制劑的優(yōu)良特性，從對蝦養(yǎng)殖環(huán)境獲得一批產(chǎn)芽孢細菌，并加以鑒定；以胞外消化酶為指標分離篩選可高效降解水產(chǎn)養(yǎng)殖殘余餌料淀粉、蛋白及脂肪作用的若干株產(chǎn)芽孢功能菌，通過酶活性測定，確定一株地衣芽孢桿菌S一40作為潛在益生菌進行了對蝦養(yǎng)殖實驗；研究了對蝦養(yǎng)殖環(huán)境的細菌群落組成，主要研究結(jié)果如下： 1.構(gòu)建了對蝦養(yǎng)殖環(huán)境細菌

2、16s rDNA文庫，研究其細菌群落組成。結(jié)果表明：對蝦腸道細菌分屬于變形細菌(Proteobacterial)和厚壁菌類群(Firmicute)，Proteobacteria占據(jù)了絕對優(yōu)勢，為98.7％，其中γ-Proteobacteria為97.4％；養(yǎng)殖水體菌群主要由變形細菌(24.1％)和擬桿菌門(17.7％)組成，其中α-Proteobacteria所占比例為21.5％；養(yǎng)殖環(huán)境表層沉積物的細菌多樣性要豐富得多，有變形細菌(5

3、2.3％)，擬桿菌門(Bacteroidetes，9.3％)，浮霉狀菌(Planctomycete，4.7％)，厚壁菌類群(Firmicute，1.9％)和放線菌門(Actinobacteria，0.9％)。此外，水樣和沉積物中蘊含著數(shù)量豐富的單細胞藻類，它們的比例分別高達55.7％和23.4％。 2.從對蝦養(yǎng)殖環(huán)境(對蝦腸道和蝦池表層沉積物)分離篩選出191株產(chǎn)芽孢細菌，細胞形態(tài)和RFLP分型后，對其中70株菌進行了生理生化以

4、及分子生物學方法鑒定。結(jié)果顯示它們分屬于短芽孢桿菌屬(2株)、芽孢乳桿菌屬(2株)、類芽孢桿菌屬(4株)和芽孢桿菌屬(44株)。其中芽孢桿菌屬中，我們鑒定得到13個種，包括環(huán)狀芽孢桿菌、遲緩芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、球形芽孢桿菌、花園芽孢桿菌、蕈狀芽孢桿菌、泛酸芽孢桿菌、短小芽孢桿菌，堅強芽孢桿菌、紡錘芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌。 3.利用選擇性培養(yǎng)基，從前期工作得到的產(chǎn)芽孢細菌中分別篩選出9株具有較高淀粉

5、酶、蛋白酶和脂肪酶活性的菌株，對其發(fā)酵條件以及粗酶液性質(zhì)進行了初步的研究。結(jié)果表明多株菌在一定的溫度、pH及鹽度區(qū)間內(nèi)均有較強的酶活力，一株地衣芽孢桿菌S-40由于其良好而穩(wěn)定的消化酶活性，作為養(yǎng)殖水體添加劑進行對蝦養(yǎng)殖實驗。 4.應(yīng)用從對蝦養(yǎng)殖環(huán)境篩選的一株地衣芽孢桿菌S-40，作為潛在的微生態(tài)制劑菌株，分別以103 cfu/mL，104 cfu/mL，105 cfu/mL三種不同濃度添加到凡納濱對蝦養(yǎng)殖水體中，測定了飼養(yǎng)40

6、天后對蝦消化道的總菌和弧菌數(shù)及多項免疫指標。結(jié)果顯示：與對照組對蝦相比，所有實驗組對蝦消化道的弧菌數(shù)有顯著下降，而總菌數(shù)沒有呈現(xiàn)顯著性差異；所有實驗組中對蝦血淋巴上清液的血細胞數(shù)，酚氧化酶活性(PO)均有顯著性上升，超氧化物歧化酶(SOD)僅在105 cfu/ml時有顯著上升，菌劑的加入對對蝦血淋巴上清液的的蛋白濃度并無顯著影響。 5.本研究選用微孔淀粉為吸附劑吸附地衣芽孢桿菌S-40菌株芽孢，通過多因素分析，確定最佳的吸附包埋