小鼠泌尿生殖系統(tǒng)顯微三維重建及DES對睪丸形態(tài)的影響.pdf

1、目的: 近來研究表明，先天性生殖系統(tǒng)畸形及其相關疾病的發(fā)生日益增加，致畸因素以及致畸機理的研究進展很快，然而，既往對生殖系統(tǒng)畸形判定指標(即形態(tài)學量化研究)的研究深度一直不夠，特別是生殖系統(tǒng)具有器官組織多且關系密切，結構細微又多管狀走行，畸形常呈現(xiàn)系統(tǒng)性和多發(fā)性等特點，以至目前常用的畸形判定指標都顯得過于粗糙且不全面，一直存在很大爭議。面對目前低劑量以及環(huán)境劑量毒物致畸效應的研究則更顯不適，迫切需要更精確、系統(tǒng)的畸形評判方法和指標。計算

2、機三維重建技術作為一門新興的技術不但能通過連續(xù)組織切片進行重建，還可以對重建的三維結構進行測量獲得器官組織長度、表面積、體積等精確參數。本研究通過對新生小鼠泌尿生殖系統(tǒng)連續(xù)組織切片三維重建并測算DES作用下新生小鼠睪丸的表面積和體積參數，并整體展現(xiàn)正常及孕期暴露不同劑量DES后新生小鼠睪丸的形態(tài)、位置和結構，以探討更為精確的評價生殖系統(tǒng)形態(tài)發(fā)育及畸形的方法。
　　 方法：8～10 周齡雌性昆明小鼠30 只隨機平均分為3 組：正常

3、組、實驗I 組及實驗II 組。
　　 于孕9～17天，實驗I 組皮下注射DES 1 μg/kg/d，實驗II 組皮下注射DES 100μg/kg/d，正常組織不給藥。待產后將新生小鼠通過肛門生殖器間距離觀察進行性別辨認抽取雄性仔鼠，每組隨機挑選6 只進行原位固定作橫斷面連續(xù)切片，常規(guī)HE染色。在帶數字照相記錄的生物顯微鏡下按一定順序攝取圖像以JPG 格式保存。通過Photoshop、3D-doctor 三維重建軟件進行對小鼠泌尿

4、生殖系統(tǒng)進行重建并獲取小鼠睪丸表面積、體積等形態(tài)參數進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果：1.正常組新生小鼠連續(xù)切片顯微顯示腎臟及睪丸形態(tài)曲線規(guī)整圓潤，位置呈右高左低。睪丸均位于膀胱頸兩側附近，遠離腎臟，睪丸附睪向下縮小演變或融合為睪丸引帶。
　　 實驗組睪丸發(fā)育差體積小，睪丸位置形態(tài)變化與DES 劑量相關：劑量越高，睪丸出現(xiàn)上移的機率越高，位置相應越接近腎臟。2.三維重建后獲得新生小鼠泌尿生殖系統(tǒng)立體圖像及形態(tài)學參數：①正常組

5、小鼠左右睪丸表面積分別為2621923.89±280270.28和2651522.14±53701.92 μm2，體積分別為432910679.57±50133711.68和418385403.85±20078887.04μm3。②實驗I 組小鼠左右睪丸表面積分別為2728634.03±200344.17和2728634.03±200344.17μm2，體積分別為442275396.27±51415726.79和432652932.27

6、±33081719.62μm3。③實驗II 組小鼠左右睪丸表面積分別為2148691.89±280270.28和2083414.40±118167.77μm2，體積分別為269457600.00±48909033.77 and 289652459.20±36903360.51 μm3。正常組與實驗組I（1μg/kg/d）左右睪丸表面積及體積大致相同，比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05），但正常組與實驗組I（1μg/kg/d）左右睪丸表面積及

7、體積明顯大于實驗組II（100μg/kg/d），比較均有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　 結論：1.本研究應用整塊組織連續(xù)切片顯微三維重建技術較為成功地重建了新生雄性小鼠的泌尿生殖系統(tǒng)的三維立體結構，確立了一種新生小鼠泌尿生殖系統(tǒng)顯微結構三維重建的實用方法。2.本研究應用整塊組織連續(xù)切片顯微三維重建技術不僅獲得了新生雄性小鼠的泌尿生殖系統(tǒng)的三維立體結構，并獲得較的精確的形態(tài)學參數指標，可辨別新生小鼠泌尿生殖系統(tǒng)中各器官的細微的