小鼠泌尿生殖系統(tǒng)顯微三維重建及DES對(duì)睪丸形態(tài)的影響.pdf

1、目的: 近來(lái)研究表明，先天性生殖系統(tǒng)畸形及其相關(guān)疾病的發(fā)生日益增加，致畸因素以及致畸機(jī)理的研究進(jìn)展很快，然而，既往對(duì)生殖系統(tǒng)畸形判定指標(biāo)(即形態(tài)學(xué)量化研究)的研究深度一直不夠，特別是生殖系統(tǒng)具有器官組織多且關(guān)系密切，結(jié)構(gòu)細(xì)微又多管狀走行，畸形常呈現(xiàn)系統(tǒng)性和多發(fā)性等特點(diǎn)，以至目前常用的畸形判定指標(biāo)都顯得過(guò)于粗糙且不全面，一直存在很大爭(zhēng)議。面對(duì)目前低劑量以及環(huán)境劑量毒物致畸效應(yīng)的研究則更顯不適，迫切需要更精確、系統(tǒng)的畸形評(píng)判方法和指標(biāo)。計(jì)算

2、機(jī)三維重建技術(shù)作為一門(mén)新興的技術(shù)不但能通過(guò)連續(xù)組織切片進(jìn)行重建，還可以對(duì)重建的三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行測(cè)量獲得器官組織長(zhǎng)度、表面積、體積等精確參數(shù)。本研究通過(guò)對(duì)新生小鼠泌尿生殖系統(tǒng)連續(xù)組織切片三維重建并測(cè)算DES作用下新生小鼠睪丸的表面積和體積參數(shù)，并整體展現(xiàn)正常及孕期暴露不同劑量DES后新生小鼠睪丸的形態(tài)、位置和結(jié)構(gòu)，以探討更為精確的評(píng)價(jià)生殖系統(tǒng)形態(tài)發(fā)育及畸形的方法。
　　 方法：8～10 周齡雌性昆明小鼠30 只隨機(jī)平均分為3 組：正常

3、組、實(shí)驗(yàn)I 組及實(shí)驗(yàn)II 組。
　　 于孕9～17天，實(shí)驗(yàn)I 組皮下注射DES 1 μg/kg/d，實(shí)驗(yàn)II 組皮下注射DES 100μg/kg/d，正常組織不給藥。待產(chǎn)后將新生小鼠通過(guò)肛門(mén)生殖器間距離觀察進(jìn)行性別辨認(rèn)抽取雄性仔鼠，每組隨機(jī)挑選6 只進(jìn)行原位固定作橫斷面連續(xù)切片，常規(guī)HE染色。在帶數(shù)字照相記錄的生物顯微鏡下按一定順序攝取圖像以JPG 格式保存。通過(guò)Photoshop、3D-doctor 三維重建軟件進(jìn)行對(duì)小鼠泌尿

4、生殖系統(tǒng)進(jìn)行重建并獲取小鼠睪丸表面積、體積等形態(tài)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：1.正常組新生小鼠連續(xù)切片顯微顯示腎臟及睪丸形態(tài)曲線規(guī)整圓潤(rùn)，位置呈右高左低。睪丸均位于膀胱頸兩側(cè)附近，遠(yuǎn)離腎臟，睪丸附睪向下縮小演變或融合為睪丸引帶。
　　 實(shí)驗(yàn)組睪丸發(fā)育差體積小，睪丸位置形態(tài)變化與DES 劑量相關(guān)：劑量越高，睪丸出現(xiàn)上移的機(jī)率越高，位置相應(yīng)越接近腎臟。2.三維重建后獲得新生小鼠泌尿生殖系統(tǒng)立體圖像及形態(tài)學(xué)參數(shù)：①正常組

5、小鼠左右睪丸表面積分別為2621923.89±280270.28和2651522.14±53701.92 μm2，體積分別為432910679.57±50133711.68和418385403.85±20078887.04μm3。②實(shí)驗(yàn)I 組小鼠左右睪丸表面積分別為2728634.03±200344.17和2728634.03±200344.17μm2，體積分別為442275396.27±51415726.79和432652932.27

6、±33081719.62μm3。③實(shí)驗(yàn)II 組小鼠左右睪丸表面積分別為2148691.89±280270.28和2083414.40±118167.77μm2，體積分別為269457600.00±48909033.77 and 289652459.20±36903360.51 μm3。正常組與實(shí)驗(yàn)組I（1μg/kg/d）左右睪丸表面積及體積大致相同，比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），但正常組與實(shí)驗(yàn)組I（1μg/kg/d）左右睪丸表面積及

7、體積明顯大于實(shí)驗(yàn)組II（100μg/kg/d），比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　 結(jié)論：1.本研究應(yīng)用整塊組織連續(xù)切片顯微三維重建技術(shù)較為成功地重建了新生雄性小鼠的泌尿生殖系統(tǒng)的三維立體結(jié)構(gòu)，確立了一種新生小鼠泌尿生殖系統(tǒng)顯微結(jié)構(gòu)三維重建的實(shí)用方法。2.本研究應(yīng)用整塊組織連續(xù)切片顯微三維重建技術(shù)不僅獲得了新生雄性小鼠的泌尿生殖系統(tǒng)的三維立體結(jié)構(gòu)，并獲得較的精確的形態(tài)學(xué)參數(shù)指標(biāo)，可辨別新生小鼠泌尿生殖系統(tǒng)中各器官的細(xì)微的