雌激素受體亞型ERα46在結(jié)直腸癌中的作用研究.pdf

1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文雌激素受體亞型ERα46在結(jié)直腸癌中的作用研究姓名：蔣海萍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：滕理送20080401浙江大學(xué)博士研究生論文結(jié)直腸癌的關(guān)系，本課題檢測了ERa46在32對結(jié)直腸癌及其相對應(yīng)的J下常結(jié)直腸組織中的表達(dá)水平；構(gòu)建了ERQ46的真核表達(dá)載體，并在人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT一29中得到穩(wěn)定表達(dá)；研究了ERQ46介導(dǎo)雌激素對結(jié)腸癌細(xì)胞HT一29的生長、侵襲及凋亡的影響。具體內(nèi)容如下：1ERQ46

2、在結(jié)直腸癌及癌旁正常組織中的表達(dá)水平用逆轉(zhuǎn)錄一實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)，檢測ERQ46在結(jié)直腸癌及其相對應(yīng)的癌旁正常組織中的表達(dá)，分析該指標(biāo)的改變及其與各臨床病理指標(biāo)(臨床分期、年齡、分化程度)的關(guān)系。結(jié)果表明：在大腸癌組織中，ERQ46的表達(dá)顯著低于相應(yīng)的癌旁『F常組織(戶0008)。但ERQ46的表達(dá)與大腸癌浸潤深度及分化程度無相關(guān)性(乃005)。2ERQ46真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)為了獲得ERa46cDNA，本課題以pcDNA3卜

3、ERQ66為模板，經(jīng)PCR，擴(kuò)增得到1400bpcDNA片段，克隆于pGEM—TEasy載體，經(jīng)DNA測序并與GenBank數(shù)據(jù)庫序列進(jìn)行比對，證實(shí)該cDNA片段即為預(yù)期的含ERQ46全長編碼區(qū)的cDNA。用肪DRl酶切將該片段克隆至真核表達(dá)載體pcDNA31()，并經(jīng)酶切鑒定。將上述表達(dá)ERa46的載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌細(xì)胞HT一29，經(jīng)Westernblot鑒定該蛋白表達(dá)在HT一29細(xì)胞中。3ERQ46的表達(dá)對HT一29細(xì)胞增殖、侵襲及

4、凋亡功能的影響應(yīng)用MTT法檢測ERQ46介導(dǎo)的雌激素對HT一29細(xì)胞體外生長能力的影響，結(jié)果表明，在雌激素的作用下，轉(zhuǎn)染ERQ46的HT一29細(xì)胞的增殖能力明顯低于轉(zhuǎn)染空載體的對照細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測表明轉(zhuǎn)染ERQ46的HT一29細(xì)胞，G吖期細(xì)胞比例增多，而G：／M期細(xì)胞比例減少。體外侵襲實(shí)驗(yàn)顯示，在雌激素的作用下，轉(zhuǎn)染ERQ46的HT一29細(xì)胞的侵襲能力低于對照組(尺005)。進(jìn)一步DNAFragmentation檢測表明，在雌激素的