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文檔簡介
1、為了建立用多聚酶鏈反應(PCR)技術快速檢測地表水中病原細菌的方法,本試驗旨在研究以Shigelladysenteriae(志賀氏痢疾菌)、Vibriocholerae(霍亂弧菌)、Salmonellatyphrmurium(沙門氏菌)和Escherichiacoli.(大腸埃希桿菌)作為參考菌株設計的通用引物在地表水病原細菌檢測中的應用價值。利用16SrRNA基因的高度保守性,設計并合成細菌的通用引物(SP1:5′-AAGGCGACG
2、ATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGA/C-3',nt1246-1280;SP2:5′-GCTTGCCAGTATCAGATGCAGTTCCCAGGTTGAGC-3′,nt1521-1556)。我們提取了西安市區(qū)幾個不同水體的水樣和某污水處理廠二級出水水樣中細菌的總DNA,使用通用引物對其進行擴增,并對PCR產物分別進行序列測定及序列同源性分析,同時檢測水樣中的細菌總數和糞大腸桿菌指標。 結果顯示,通用引物擴增4種參考
3、菌株,在電泳圖譜上320bp處均可得到清晰的電泳條帶,其特異性通過序列測定及同源性分析得到進一步驗證;通用引物PCR可檢出250ng/L的大腸桿菌總DNA,其檢測的靈敏度可達27.5cfu/100mL;用通用引物對西安市區(qū)不同地表水樣進行PCR擴增,其中一條河流和三個湖泊以及城市污水處理廠的二級出水樣品的電泳圖譜上,在320bp處都得到了清晰的電泳條帶,以上的所有水體都被確認為受到了生活污水的影響;而另外一條被保護的很好并可用作飲用水供
4、應的水樣中未擴增出條帶。我們也使用了傳統培養(yǎng)的方法對細菌進行計數,并與PCR進行比較。與之相對應的糞大腸菌群檢測結果顯示,只有污水處理廠二級出水和一條被污染的湖水水樣有糞大腸桿菌檢出,其它水樣未被檢出,而使用通用引物PCR方法除了可以檢測到糞大腸桿菌外,還可以檢測到水樣中其它的一些病原細菌。 本研究中建立的用PCR方法檢測水體中病原細菌與傳統檢測方法相比較,已經顯示出具有特異、快速等優(yōu)點,它為水環(huán)境中細菌的風險評價提供了一種更為
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