免疫捕捉PCR技術(shù)在嚴(yán)重傳染病快速檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、本文探討ic-PCR 法在四種嚴(yán)重傳染病病原：霍亂弧菌、大腸埃希氏菌O157、SARS 冠狀病毒和流感病毒檢測(cè)中的應(yīng)用。1. 三種免疫捕捉法：微孔板、200ulPCR 管和免疫磁珠，均可從環(huán)境樣品和人體樣品中特異捕捉霍亂弧菌、大腸埃希氏菌O157、SARS 冠狀病毒和流感病毒，較傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)方法可節(jié)省大量時(shí)間。免疫磁珠法因可處理的樣品量大，反應(yīng)動(dòng)力學(xué)特性更佳，是最合適的免疫捕捉方法。2. 細(xì)菌的檢測(cè)：在O1、O139 群霍亂弧菌的群特

2、異性抗原基因和腸毒素基因上，設(shè)計(jì)3 對(duì)引物進(jìn)行多重PCR，一次PCR 反應(yīng)即可檢測(cè)出霍亂弧菌，區(qū)分血清群別及是否為流行毒株。PCR 擴(kuò)增序列與預(yù)計(jì)序列完全一致，檢測(cè)限低于100cfu/ml；根據(jù)大腸埃希氏菌O157的rfb 基因設(shè)計(jì)的巢式PCR 引物擴(kuò)增，可特異擴(kuò)增497bp 片段，序列與S83460 完全一致，檢測(cè)限約102cfu/ml，免疫磁珠法略高于200ulPCR 管法。3. SARS 冠狀病毒的檢測(cè)：微孔板法捕捉的病毒顆粒，經(jīng)

3、熱裂解后熒光RT-PCR 檢測(cè)SARS 病毒RNA 的保守序列片段，臨床標(biāo)本檢測(cè)未出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，避免了直接提取標(biāo)本總RNA 進(jìn)行熒光RT-PCR 檢測(cè)時(shí)產(chǎn)生假陽(yáng)性的干擾，檢測(cè)限101copies，靈敏度比推薦用的熒光RT-PCR 試劑盒標(biāo)稱值提高了10 倍，在臨床病人的診斷上具有重要的參考意義。4. 流感病毒的檢測(cè)：流感病毒對(duì)人類危害最大的主要是A/H1和A/H3 兩型。200ul PCR 管結(jié)合RT-PCR 擴(kuò)增NP 基因，檢測(cè)限約