HIV-1非人靈長(zhǎng)類易感動(dòng)物模型前期研究.pdf

1、艾滋病研究尚缺乏合適的動(dòng)物模型。非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型被認(rèn)為是研究艾滋病毒(HIV-1)感染的理想動(dòng)物模型,但天然抗逆轉(zhuǎn)錄病毒的限制因子的存在限制了HIV-1的跨種間感染。近年研究表明TRIM5α和APOBEC3G(A3G)是主要的限制因子。猴TRIM5α結(jié)合HIV-1的衣殼蛋白(CA)而限制其復(fù)制,而一些舊大陸猴中發(fā)現(xiàn)了TRIM5α的一種CypA基因插入剪接突變體TRIMCyp,其失去了對(duì)HIV-1的限制。A3G主要包裹在病毒顆粒中,對(duì)第

2、二輪的感染具有限制作用,且這種限制作用具有種屬特異性,即人A3G不能限制HIV-1的復(fù)制,卻對(duì)猴艾滋病毒(SIV)具有限制作用。反之,猴的A3G不能限制SIV,卻能限制HIV-1。這種種屬的特異性只由數(shù)個(gè)氨基酸位點(diǎn)決定,若突破這兩種限制,則HIV-1有可能感染猴。
　　 本研究首先對(duì)SIV的SIVmac239與猴從艾滋病毒的SHIV89.6P這兩株病毒進(jìn)行拯救、鑒定、并定量,作為后續(xù)動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)的參考毒株。此外,本文首次應(yīng)用毛發(fā)

3、PCR法對(duì)中國(guó)品系獼猴TRIMCyp進(jìn)行了篩選,并在食蟹猴中篩選出了TRIMCyp純合子個(gè)體,建立了可靠的毛發(fā)檢測(cè)方法,僅需一到兩根毛發(fā)即可滿足對(duì)基因組DNA的提取,減少了采血檢測(cè)對(duì)猴體的傷害。在此基礎(chǔ)上,首次對(duì)中國(guó)TRIMCyp純合子個(gè)體食蟹猴A3G基因進(jìn)行克隆表達(dá),并在該基因決定種屬特異性關(guān)鍵性限制位點(diǎn)進(jìn)行突變,進(jìn)行了限制性實(shí)驗(yàn)研究。同時(shí),對(duì)人APOBEC3G基因也進(jìn)行了克隆表達(dá),并根據(jù)獼猴序列,在相應(yīng)位點(diǎn)進(jìn)行了點(diǎn)突變,作為參照。研