HIV-1膜抗原改造和免疫策略研究.pdf

1、本文為了探討如何改善HIV-1膜蛋白作為疫苗抗原的免疫原性，對(duì)HIV-1 gp160進(jìn)行改造將之截短為gp140和gp145，以降低其細(xì)胞毒性并改善免疫原性，所用毒株包括我國(guó)兩個(gè)主要流行株：B`亞型的RL-42和B`/C重組亞型的CN54；隨后，又對(duì)HIV-1<,cn54>的gp140和gP145進(jìn)行了抗原修飾研究。 為了明確HIV-1膜蛋白gp140和gp145免疫原性的差異，分別構(gòu)建了2個(gè)DNA疫苗(svl40rl、sv14

2、5d)和2個(gè)重組天壇株痘苗(RTTV140rl、rTTV145rl)，并采用初免-加強(qiáng)的免疫方式在小鼠體內(nèi)進(jìn)行了免疫原性檢測(cè)。 免疫結(jié)束后，分離小鼠血清和脾細(xì)胞進(jìn)行體液免疫檢測(cè)(Elisa、PLL-Elisa)和細(xì)胞免疫檢測(cè)(Elispot)。特異性T細(xì)胞反應(yīng)檢測(cè)結(jié)果顯示：gP 145初免能比gp140初免誘導(dǎo)更高T細(xì)胞免疫反應(yīng)，但只有在單獨(dú)使用DNA疫苗進(jìn)行免疫時(shí)，兩者之間才有顯著性差異。并且，在初免一加強(qiáng)策略中，最終的T細(xì)胞

3、反應(yīng)強(qiáng)弱主要取決于初免的效率。體液免疫檢測(cè)結(jié)果顯示：雖然各組小鼠，在血清特異性結(jié)合抗體滴度上沒有顯著性差異，但線性表位定位的結(jié)果卻提示gP145初免組的小鼠血清比gP140初免組的小鼠血清能識(shí)別更多的線性表位，并且這些表位與gp145比gP140多出的氨基酸序列無關(guān)。為了探討兩種抗原修飾方式對(duì)HIV-1<,cn54>gP140和gP145免疫原性的不同影響，先后構(gòu)建了6個(gè)DNA疫苗(sV140、sV145、sv140dG、sV140dV

4、、sv145dG、sv145dV)和6個(gè)重組天壇株痘苗(rTTV140、rTTV145、rTTV140dG、rTTV140dV、rTTV145dG、rTTV145dV)并運(yùn)用初免-加強(qiáng)的免疫方式在小鼠體內(nèi)進(jìn)行了免疫原性比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：無論是在特異性結(jié)合抗體滴度方面，還是在細(xì)胞免疫方面，刪除環(huán)區(qū)均比突變掉糖基化位點(diǎn)顯示出更優(yōu)越的免疫原性。研究結(jié)果還顯示，改造對(duì)gP140和gP145誘導(dǎo)特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)能力的影響是不同的：改造后的抗原