HIV-1 Nef基因的克隆、表達及其核酸疫苗的實驗免疫研究.pdf

1、艾滋病病毒l型(HIV-1)屬于單股正鏈核糖核酸(RNA)逆轉(zhuǎn)錄病毒。該病毒因具有高突變率、高重組率和高復制率等特點，故其基因組能快速變異，產(chǎn)生大量變異株，從而順利逃脫宿主的免疫壓力，致使HIV感染者/艾滋病(HIV/AIDS)患者總數(shù)日趨增多。
　　 Nef（負因子）是一種N-末端豆蔻酰化蛋白質(zhì)。盡管Nef對于病毒的體外復制是非必需的，但它在HIV-1體內(nèi)致病中發(fā)揮作用。自從nef基兇被成功克隆后，數(shù)以千計的關于Nef功能的論

2、文已發(fā)表，這些發(fā)現(xiàn)確定了Nef的四個主要功能：(1)調(diào)節(jié)細胞表面分子的表達量，(2)增強病毒感染力，(3)干擾細胞信號傳導，(4)操控細胞凋亡機制。雖然這些發(fā)現(xiàn)的生物學相關性有待于進一步確認，但它提示了Nef的體外功能和HIV-I在體內(nèi)致病性之間的相關性。
　　 在多種病毒性疾病的動物模型上已經(jīng)證實核酸疫苗可以誘導產(chǎn)牛體液和細胞介導的保護性免疫反應。核酸疫苗的興起和發(fā)展為HIV的防治提供了新的途徑。核酸疫苗可誘導機體產(chǎn)生細胞及體

3、液免疫反應，特別是誘導細胞免疫反應的能力優(yōu)于蛋白、多肽類疫苗。
　　 核酸疫苗的免疫效果在不同動物個體中差異較大，某些腫瘤及病毒的T、B細胞表位抗原性弱，難以誘導有效的T、B細胞免疫應答，提高核酸痰苗的免疫效果已成為研究熱點。基因佐劑是將編碼某些細胞網(wǎng)子及T、B細胞表面共刺激分子等的基因與目的基因克隆于同一載體或不同載體共同免疫動物，其表達的相應蛋白可起到佐劑的作用，從而大大增強T、B細胞的免疫應答水平。
　　 LIGH

4、T是TNF配體家族的成員，可以共刺激T細胞增殖。HVEM是LIGHT介導T細胞活化的受體，LIGHT通過與HVEM結(jié)合發(fā)揮共刺激作用，參與T細胞增殖和細胞因子的產(chǎn)生。越來越多的證據(jù)表明LIGHT與其受體的相互作用可作為控制細胞免疫應答的潛在目標。
　　 基于Nef在HIV感染中的罩要作用，以nef作為靶基因制備HIV核酸疫苗，并研究其免疫效果具有重要意義。本研究利用基因重組技術構建含有nef基因的高效原核表達載體pET24-Ne

5、f,并在大腸桿菌BL21中表達高效HIV-1Nef蛋白；利用Nef蛋白免疫家兔，得到高效價兔抗HIV-1nef血清；將全長nef基因插入pcDNA3.1(+)載體巾構建真核表達質(zhì)粒pcDNA-Nef,體外轉(zhuǎn)染檢測結(jié)果表明真核表達質(zhì)粒中的nef基因可在哺乳動物細胞中進行表達；將nef核酸疫苗質(zhì)粒單獨或與LIGHT真核表達質(zhì)粒聯(lián)合免疫Balb/c小鼠，細胞免疫與體液免疫功能檢測結(jié)果表明nef核酸疫苗可以誘導小鼠產(chǎn)生特異性免疫應答，LIGHT