表達(dá)HIV-1gag基因的多載體疫苗聯(lián)合免疫的研究.pdf

1、人免疫缺陷病毒-1（human immunodeficiency Vires，HIV-1）自20世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)以來(lái)，已在全球造成大約3340萬(wàn)人感染艾滋病，其中去年新增感染者270萬(wàn)人，200萬(wàn)人死于與艾滋病相關(guān)的疾病。截至2009年10月底，我國(guó)累計(jì)報(bào)告艾滋病病毒感染者和病人319877例，其中艾滋病病人102323例；報(bào)告死亡49845例，艾滋病疫情呈上升趨勢(shì)，存在疫情進(jìn)一步蔓延的危險(xiǎn)。越來(lái)越多的研究表明HIV抗原特異性的CD8+

2、T細(xì)胞免疫應(yīng)答在清除病毒感染的細(xì)胞，降低血液中的病毒載量起著重要的作用，因此研究誘導(dǎo)T細(xì)胞免疫反應(yīng)的HIV-1疫苗具有很好的現(xiàn)實(shí)意義，可以達(dá)到延緩感染者發(fā)展為AIDS的進(jìn)程、減少HIV傳播、控制艾滋病流行范圍等目的。
　　 HIV-1 B亞型和B/C重組亞型病毒是在中國(guó)流行較廣的兩種病毒亞型，具有分布范圍廣，新增感染人數(shù)多的特點(diǎn)。我們擬通過(guò)將表達(dá)B亞型和B/C重組亞型HIV抗原的多種載體疫苗聯(lián)合應(yīng)用來(lái)誘導(dǎo)高水平并且持久的HIV特

3、異性細(xì)胞免疫反應(yīng)。
　　 本研究中采用表達(dá)HIV-1 B/C重組亞型gag-env-pol基因的DNA和重組痘病毒疫苗（rMVA）及表達(dá)HIV-1B亞型gag基因的DNA疫苗和重組腺病毒疫苗（rAdV）在小鼠體內(nèi)聯(lián)合免疫，比較了兩種疫苗聯(lián)合免疫與三種疫苗聯(lián)合免疫所誘導(dǎo)的Gag特異性細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)的水平。實(shí)驗(yàn)中采用ELISpot方法檢測(cè)細(xì)胞免疫反應(yīng)，ELISA方法檢測(cè)血清中P24抗原特異性的IgG抗體的滴度。結(jié)果顯示，兩種

4、亞型的DNA疫苗與rMVA疫苗聯(lián)合免疫的細(xì)胞免疫反應(yīng)都明顯低于與rAdV疫苗聯(lián)合免疫組，后者是前者的2～8倍。rMVA與rAdV疫苗聯(lián)合免疫的細(xì)胞免疫反應(yīng)水平與免疫順序有關(guān)，先免疫rMVA疫苗的方案優(yōu)于先免疫rAdV疫苗的方案。三種疫苗聯(lián)合免疫的方案DNA/rAdV/rMVA與DNA/rMVA/rAdV跟上述兩種疫苗聯(lián)合免疫的方案相比，細(xì)胞免疫反應(yīng)水平明顯增強(qiáng)，而且rMVA和rAdV疫苗加強(qiáng)免疫的先后順序?qū)γ庖咝Ч麤](méi)有影響。在體液免疫方

5、面，各組均能誘導(dǎo)很強(qiáng)的p24抗原特異的IgG抗體。
　　 將rMVA疫苗免疫已經(jīng)接受過(guò)DNA+rSeV+rADV疫苗免疫及DNA+rAdV+rSeV疫苗免疫的恒河猴，結(jié)果所有接種疫苗的恒河猴均產(chǎn)生了針對(duì)B亞型Gag肽庫(kù)的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答和P24特異性抗體反應(yīng)。在rMVA疫苗初次免疫后的5～8周間，細(xì)胞免疫反應(yīng)達(dá)到一個(gè)反應(yīng)高峰，在之后的十幾周內(nèi)都能持續(xù)一個(gè)相對(duì)較高的水平，說(shuō)明不同載體疫苗的聯(lián)合免疫可以減小機(jī)體對(duì)載體的免疫應(yīng)答，更

6、久地維持針對(duì)病原抗原的細(xì)胞免疫應(yīng)答，這對(duì)抑制感染者體內(nèi)病毒的擴(kuò)增有積極的意義。同時(shí)也能在恒河猴體內(nèi)誘導(dǎo)較強(qiáng)的體液免疫反應(yīng)，峰值產(chǎn)生的時(shí)間較之前免疫其他疫苗時(shí)早，這可能與之前免疫過(guò)含gag基因的疫苗有關(guān)，但是這種特異性體液免疫反應(yīng)持續(xù)的時(shí)間較短。rMVA疫苗初次免疫后30周進(jìn)行第二次MVA疫苗的加強(qiáng)免疫，4周后又檢測(cè)到了比初次免疫更強(qiáng)的Gag特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)，目前仍在監(jiān)測(cè)中。
　　 綜上所述，多種疫苗聯(lián)合應(yīng)用能多次誘導(dǎo)特異性細(xì)胞