滿天星試管玻璃化苗與正常苗的比較研究.pdf

1、試管植物的玻璃化，是指試管苗外觀形態(tài)呈半透明狀的生長(zhǎng)異?，F(xiàn)象。一旦形成玻璃化苗，植株的增殖系數(shù)即明顯下降，既不能再用于后續(xù)的生根或繼代增殖培養(yǎng)，移栽也難以成活。因此，玻璃化是試管苗生產(chǎn)中亟待解決的一個(gè)問(wèn)題。本試驗(yàn)以滿天星試管正常苗和玻璃化苗為材料，通過(guò)對(duì)生理生化特性、酯酶同工酶、過(guò)氧化物同工酶和RAPD指紋圖譜等方面進(jìn)行了研究，探討了滿天星試管正常苗和玻璃化苗的差異，為進(jìn)一步研究滿天星試管苗玻璃化發(fā)生機(jī)理提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。主要研究

2、結(jié)果如下： 玻璃化苗組織含水量較高，為95.8％，而正常苗為91.7％，顯著高于正常苗。玻璃化苗的各種葉綠素含量及可溶性糖和還原糖含量分別為正常苗的14.0％，63.8％和86.9％，顯著低于正常苗；而玻璃化苗的過(guò)氧化物酶(POD)活性增加，是正常苗的3倍多。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳法對(duì)酯酶同工酶和過(guò)氧化物同工酶進(jìn)行了分析，結(jié)果玻璃化苗的酯酶同工酶電泳譜帶出現(xiàn)缺失的異常現(xiàn)象，同時(shí)其譜帶顏色較淺；玻璃化苗的過(guò)氧化物酶活性明顯高于正常

3、苗，與過(guò)氧化物酶活性測(cè)定的結(jié)果一致，且玻璃化苗過(guò)氧化物酶的譜帶數(shù)也明顯多于正常苗，這種酶譜反映了玻璃化苗和正常苗的堿性過(guò)氧化物同工酶譜帶和酶活性上的差異。以CTAB法提取正常苗和玻璃化苗的基因組DNA，經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)，適合RAPD分析的需要。建立了滿天星適宜的RAPD反應(yīng)體系：總反應(yīng)體積為25 μl，其中包括14.17μlddH<,2>O，150 μmol/L dNTlP，1.5 mmol/L MgCl<,2>，2.5μl Buffer，0.

4、3 μmol/L引物，10 ng DNA模板，1 U Taq DNA聚合酶。反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5 min，94℃變性1 min，36℃退火1 min，72℃延伸1.5 min：45個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸7 min。 RAPD結(jié)合BSA(分離群體分組分析法)，用100個(gè)隨機(jī)引物對(duì)滿天星試管正常苗和玻璃化苗的兩個(gè)基因池進(jìn)行RAPD指紋圖譜分析，發(fā)現(xiàn)有7個(gè)隨機(jī)引物擴(kuò)增出了多態(tài)性的差異譜帶。再用上述7條引物分別對(duì)滿天星試管苗及其玻