內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白3的血清學(xué)分析及其在K562分化過程中的表達(dá)變化.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)旨在通過對血清RTN3的血清學(xué)分析，初步探討RTN3在血清中穩(wěn)定存在的原因，并分析動(dòng)脈粥樣硬化病人與正常人間是否存在差異;通過對K562細(xì)胞分化過程中RTN3表達(dá)變化的研究，初步探討血清RTN3的來源及其在細(xì)胞分化過程中可能存在的作用。
　　方法:(1)收集正常人和病人的外周血液及他們的相關(guān)信息，WB檢測血清RTN3，并用胰酶處理血清檢測RTN3的降解情況;(2)ELISA檢測正常人和病人血清RTN3含量的差異，并結(jié)合

2、其他血清學(xué)指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;(3)分離外周血單個(gè)核細(xì)胞對RTN3進(jìn)行表面免疫熒光染色，用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面熒光;(4)利用公共數(shù)據(jù)庫的蛋白質(zhì)芯片數(shù)據(jù)分析RTN3在血液系統(tǒng)中的表達(dá)情況;檢測K562細(xì)胞及上清中的RTN3，利用丁酸鈉誘導(dǎo)K562分化，檢測RTN3表達(dá)及其在細(xì)胞內(nèi)分布情況。
　　結(jié)果:(1)正常人與動(dòng)脈粥樣硬化病人血清中均能檢測出RTN3;WB檢測到胰酶處理的血清中存在RTN3的降解帶，且降解帶與胰酶處理時(shí)間

3、并無直接聯(lián)系;(2)血清ELISA結(jié)果分析表明，病人血清中RTN3的含量比正常人高，且病人血清RTN3含量與其血清HDL水平呈負(fù)相關(guān);在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)在一定濃度范圍內(nèi)，巨噬細(xì)胞RAW264.7內(nèi)RTN3的表達(dá)隨著HDL作用濃度的升高而降低;(3)分離外周血單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示，單個(gè)核細(xì)胞表面存在RTN3的表達(dá);(4)在K562上清中也檢測出RTN3的存在;丁酸鈉誘導(dǎo)K562分化過程中，RTN3的表達(dá)及其在細(xì)胞中分布均發(fā)生變化

4、;公共數(shù)據(jù)庫的蛋白質(zhì)芯片數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)RTN3在血液系統(tǒng)中有較高的表達(dá)。
　　結(jié)論:(1)血清RTN3胰酶處理后，并未完全降解，初步說明了RTN3能較穩(wěn)定存在于復(fù)雜血液系統(tǒng)中的原因;(2)正常人和動(dòng)脈粥樣硬化病人血清RTN3存在差異，病人血清RTN3與其HDL水平呈負(fù)相關(guān)，可以作為動(dòng)脈粥樣硬化的標(biāo)志物;(3)外周血單個(gè)核細(xì)胞表面檢測到RTN3的表達(dá)以及在K562細(xì)胞上清中檢測出RTN3，說明血清RTN3可能來源于血液細(xì)胞中;(4)