人乳頭瘤病毒感染型別及整合狀態(tài)與宮頸癌發(fā)生的相關(guān)性研究.pdf

1、宮頸癌(cervical cancer,CC)是全球女性中第二位常見的惡性腫瘤,其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。約80％的CC病例發(fā)生在發(fā)展中國家,在中國每年大約有11萬的CC新發(fā)病例,大約2～3萬人死于該病。人乳頭瘤病毒(human papillomaviruses,HPVs)感染已被公認(rèn)是CC及其癌前病變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的必要但非充分因?yàn)椤Ｄ壳?100多種HPV基因型己被鑒定,其中

2、約40種與生殖道感染相關(guān),依其致癌性的不同可分為高危型(high-risk HPV,HR-HPV)可能高危型和低危型(low-risk HPV,LR-HPV)。HR-HPVs包括HPV 16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68,73和82型；可能高危型包括HPV 26,53和66型；LR-HPV包括HPV 6,11,40,42,43,44,54,61,70,72,81和CP6108型。一些流行病學(xué)資料

3、顯示,HPV的感染率和型別分布存在區(qū)域性差異。此外,預(yù)防性病毒顆粒樣HPV疫苗的效應(yīng)具有型特異性。因此,有關(guān)某一特定人群HPV感染的最新資料對于宮頸癌的篩查、HPV疫苗的有效研制和評估以及對采取保守治療的宮頸病變女性的隨訪均是必需的。目前,關(guān)于遼寧地區(qū)宮頸病變女性中HPV感染率和型別分布的研究鮮見報(bào)道。
　　 約80％的女性在其一生中曾感染HPV,而僅一小部分女性最終發(fā)展成為CC。因此,除HR-HPV感染之外,CC的發(fā)生尚需要其

4、他一些高危因素的存在,例如環(huán)境因素,宿主因素,或與病毒相關(guān)的因素,包括HPV的型別、整合或病毒載量。HPV DNA在宿主細(xì)胞中以三種狀態(tài)存在:即環(huán)狀的游離基因,或整合入宿主細(xì)胞的DNA中,或二者共存的混合型。目前,HR-HPV DNA在宿主細(xì)胞染色體中的整合是一個(gè)非?；钴S的研究領(lǐng)域。已有的相關(guān)研究大多針對世界范圍內(nèi)宮頸癌中最常見的HPV基因型,即16和18型,二者的檢出率大約分別占全球CC病例的50％和20％。研究顯示,在HPV18陽性

5、的高度宮頸病變和CC標(biāo)本中病毒DNA幾乎均為整合型。而在HPV16陽性的不同宮頸病變中病毒DNA的整合結(jié)果卻很不一致。此外,有關(guān)其它HR-HPV型在CC及其癌前病變中整合狀態(tài)的研究報(bào)道很少。最近一項(xiàng)關(guān)于宮頸病變中5種最常見的致癌型HPV(HPV16,18,31,33,和45型)整合狀態(tài)的研究顯示,宮頸病變中HR-HPV的整合率具有型別依賴性。另外,最近研究提示HPV 16型DNA的整合并非一定導(dǎo)致高水平的E6/E7癌基因的表達(dá)。因此,有

6、關(guān)HPV整合在宮頸癌發(fā)生中的作用尚需進(jìn)一步研究。盡管HPV58在世界范圍內(nèi)通常被認(rèn)為是很少見的感染型別,但在一些中國人群中其感染率卻非常高。最新研究結(jié)果顯示,HPV16、18和58型在遼寧地區(qū)宮頸癌標(biāo)本中是前三位最常見的感染型別。目前,關(guān)于HPV58型在不同宮頸病變中存在狀態(tài)的研究資料非常有限。而關(guān)于HPV18型在高度宮頸病變和CC標(biāo)本中存在狀態(tài)的報(bào)道幾乎均為整合型。因此,本研究將HPV16或58型陽性的不同宮頸病變脫落細(xì)胞標(biāo)本作為研究

7、對象。
　　 本研究采用新近引入的凱普導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)(HybriMax)對1444例女性手術(shù)前的宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行HPV感染的基因分型檢測。探討了遼寧地區(qū)進(jìn)行宮頸癌機(jī)會性篩查的女性中不同宮頸病變HPV的感染率和型別分布。此外,我們分析了不同HPV基因型感染與宮頸組織病理學(xué)檢查結(jié)果的相關(guān)性以及HybriMax技術(shù)對宮頸病變診斷的準(zhǔn)確性。另外,本研究采用多重PCR技術(shù)對HPV16型陽性(493例)及HPV58型陽性(74例)

8、的不同子宮頸病變女性的宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行了HPV整合狀態(tài)的檢測。通過比較不同子宮頸病變中HPV16和58型整合狀態(tài)的差異,進(jìn)一步探討了HR-HPV DNA整合在宮頸癌發(fā)生中的作用。
　　 材料與方法：
　　 1、采用導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)對1444例女性的宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行HPV基因分型檢測,包括經(jīng)組織病理學(xué)確診的CC 134例,CIN Ⅱ/Ⅲ 517例和CIN Ⅰ 180例。此外,613例年齡匹配的除外子宮頸瘤變女性

9、的宮頸細(xì)胞學(xué)標(biāo)本作為對照組。分析不同宮頸病變中HPV感染的型別分布及不同基因型HPV感染與宮頸病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性。
　　 2、采用多重PCR技術(shù)檢測493例HPV16陽性的宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本中HPV16型的E2及E6基因,包括經(jīng)組織病理學(xué)確診的CC 103例,CIN Ⅱ/Ⅲ 351例,CINⅠ 34例,慢性宮頸炎65例。另外40例排除宮頸病變的正常宮頸細(xì)胞學(xué)標(biāo)本作為對照組。通過E2/E6比值法評估HPV16型的體內(nèi)狀態(tài)。分析HP

10、V16型的整合及含有HPV16的多型感染與宮頸病變程度的相關(guān)性。
　　 3、采用多重PCR技術(shù)檢測73例HPV58陽性的宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本中HPV58型的E2及E6基因,包括經(jīng)病理證實(shí)的CC 7例,CIN Ⅱ/Ⅲ 20例,CIN Ⅰ 15例,慢性宮頸炎11例及20例經(jīng)除外宮頸病變的正常宮頸細(xì)胞學(xué)標(biāo)本。通過E2/E6比值法評估HPV58型的體內(nèi)狀態(tài)。比較不同宮頸病變中HPV58及16型整合狀態(tài)的差異；分析HPV58型整合與宮頸病變程

11、度的相關(guān)性。
　　 結(jié)果
　　 1、在宮頸癌組、CIN Ⅱ/Ⅲ組、CIN Ⅰ組及慢性宮頸炎組中HPV的感染率分別為82.84％,89.56％,70.56％及44.70％。在CIN Ⅱ/Ⅲ病變中前5位常見的基因型(依感染率遞減)依次為:HPV 16(61.12％),58(14.12％),33(13.93％),31(8.32％)和52(6.27％)；而在宮頸癌中為HPV 16(73.13％),18(7.46％),58(3.7

12、3％)和31/33/39(均為2.24％)。多型HPV感染占研究人群的17.59％,包括2至5種HPV型別。HPV 16型在所有宮頸病變分類中均為最常見的基因型。HPV 16型及單型HR-HPV感染率均隨宮頸病變嚴(yán)重性的增加而升高(P=0.000)。
　　 2、HPV16型在宮頸癌、CIN Ⅱ/Ⅲ、CIN Ⅰ、慢性宮頸炎及正常宮頸細(xì)胞學(xué)標(biāo)本中的整合率分別為67.96％(70/103),21.37％(75/351),8.82％(3

13、/34),7.69％(5/65)和5.00％(2/40)。HPV 16型的整合率隨宮頸病變嚴(yán)重程度的增加而升高(P=0.000)。含有HPV16的多型HR-HPV感染與宮頸病變的嚴(yán)重程度無相關(guān)性,而單型HPV16感染與宮頸病變程度呈正相關(guān)(P=0.000)。
　　 3、HPV58型在宮頸癌、CIN Ⅱ/Ⅲ、CIN Ⅰ、慢性宮頸炎及正常宮頸細(xì)胞學(xué)標(biāo)本中的整合率分別為28.57％(2/7),20.00％(4/20),13.33％(2

14、/15),9.09％(1/11)和10.00％(2/20)。HPV58型的整合率隨宮頸病變嚴(yán)重性的增加趨于升高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.566)。宮頸癌中HPV58型的整合率與HPV16型不同,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.047)。
　　 結(jié)論：
　　 1、HPV 16,18,58,33和31型感染可能是遼寧地區(qū)宮頸癌及其癌前病變的主要高危因素。針對HPV16和18型的預(yù)防性疫苗對本地區(qū)宮頸癌防護(hù)的有效性接近80％。<

15、br>　　 2、HPV 16型的整合在早期宮頸病變(CIN Ⅰ)及正常宮頸細(xì)胞中均可能發(fā)生。HPV 16型DNA在宿主細(xì)胞染色體中的整合明顯促進(jìn)了宮頸病變的惡性進(jìn)展。HPV 16型感染是宮頸癌發(fā)生的最主要危險(xiǎn)因素。
　　 3、宮頸癌標(biāo)本中存在相當(dāng)一部分游離型的HPV16(32.04％)及HPV58(72.43％),提示在HR-HPV感染導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的過程中存在另一條不同于E2ORF斷裂而導(dǎo)致E6、E7癌基因表達(dá)升高的致癌途徑