馬鈴薯黑痣病菌系統(tǒng)發(fā)育分析及融合群快速鑒定.pdf

1、馬鈴薯黑痣病是由立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）引起的一種重要馬鈴薯土傳病害。近年來(lái)，該病在我國(guó)北方馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)已成為重要病害，嚴(yán)重影響著馬鈴薯塊莖的品質(zhì)、商品價(jià)值及產(chǎn)量。本研究主要對(duì)黑痣病菌營(yíng)養(yǎng)親和群及致病力進(jìn)行測(cè)定，rDNA-ITS、TEF-1α兩對(duì)基因聯(lián)合系統(tǒng)發(fā)育分析，利用Cytb基因片段長(zhǎng)度差異快速鑒定不同融合群。主要研究結(jié)果如下:
　　1.內(nèi)蒙古和河北兩省馬鈴薯黑痣病菌104株，通過(guò)對(duì)峙培養(yǎng)，進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)親

2、和群的劃分，共可劃分為50個(gè)營(yíng)養(yǎng)親和群。其中，AG3所有菌株共劃分為17個(gè)不同營(yíng)養(yǎng)親和群，其中AG3-N占測(cè)試菌株比例最高，為11.32％;其次是AG3-F和AG3-A，出現(xiàn)頻率分別為4.81％和3.85％; AG2-1融合群內(nèi)AG2-1-B和AG2-1-A的出現(xiàn)頻率較高，分別為4.81％和3.85％;其它營(yíng)養(yǎng)親和群的出現(xiàn)頻率均較低(0.96～2.89％)。
　　2.對(duì)馬鈴薯黑痣病菌7個(gè)融合群的代表菌株進(jìn)行土壤接菌法致病力測(cè)定結(jié)果

3、表明，除AG-A無(wú)致病能力外，其它融合群均致病;而且，不同融合群菌株之間以及不同營(yíng)養(yǎng)親和群菌株之間的致病力同樣存在差異。其中，AG3致病力最強(qiáng)，AG4和AG5次之，AG2-1、AG9和AG1-IB最弱。癥狀上也存在一定差異，與其它融合群對(duì)馬鈴薯的致病力相比，AG3菌株引起的病斑顏色較深，損傷面積較大。
　　3.對(duì)馬鈴薯黑痣病菌7個(gè)不同融合群菌株進(jìn)行ITS序列比對(duì)分析，結(jié)果表明，5.8s rDNA序列在所有融合群中高度保守，ITS區(qū)

4、具有高度的多態(tài)性，并且ITS1區(qū)段比ITS2區(qū)段的變異位點(diǎn)多。不同融合群間ITS相似度范圍是84.2～96.3％，而同一融合群內(nèi)ITS序列相似度為92.1％～99.9％。AG4融合群內(nèi)共存在三個(gè)融合群亞群，AG4HGⅠ與AG4HGⅡ的ITS序列關(guān)系較近，而與AG4HGⅢ的關(guān)系相當(dāng)較遠(yuǎn)。表明ITS序列可以用于融合群及亞群系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系進(jìn)行分析。
　　4.下載擔(dān)子菌門(mén)延伸因子基因序列，比對(duì)分析并根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)立枯絲核菌延伸因子基因引物對(duì)

5、TEF1α-RSF: CGTGAYTTYATCAAGAACATG/TEF1α-RSR: GACTTGACTTCAGTGGTCAC，擴(kuò)增產(chǎn)物片段長(zhǎng)度約為680bp左右?；赥EF-1α序列信息對(duì)不同融合群代表菌株進(jìn)行遺傳關(guān)系分析，不同融合群菌株間延伸因子序列相似性范圍是85.2～93.9％，融合群內(nèi)序列相似度為92.4～99.9％。構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)與ITS系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基本一致，支持率略有不同。不同融合群及亞群的延伸因子氨基酸序列比對(duì)

6、分析發(fā)現(xiàn)，融合群內(nèi)部沒(méi)有差異而融合群間共存在13個(gè)氨基酸的變異位點(diǎn)。結(jié)果表明，保守的功能基因TEF-1α能夠有效對(duì)立枯絲核菌進(jìn)行融合群及亞群的劃分。
　　5.根據(jù)AG3和AG1-IB細(xì)胞色素b基因序列設(shè)計(jì)引物CytbRS-F/CytbRS-R，不同融合群的擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度在550bp到1000bp之間?？梢詫?duì)馬鈴薯黑痣病菌常見(jiàn)融合群AG1-IB、AG2-1、AG3、AG4-HGⅡ、AG5菌株進(jìn)行有效擴(kuò)增，不同融合群間Cytb擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)