溶血磷脂酸及其受體在妊娠期高血壓疾病的變化及意義.pdf

1、背景和目的 妊娠期高血壓疾病是影響妊娠預(yù)后最常見的妊娠期特有疾病，直接威脅母體及胎兒的生命安全，是孕產(chǎn)婦和圍生兒病率及死亡率的主要原因。迄今為止，妊娠期高血壓疾病的病因及病理機制尚不清楚，目前多認為其發(fā)病機制可能與血管內(nèi)皮細胞損傷、自身免疫、凝血系統(tǒng)及纖溶系統(tǒng)失調(diào)等有關(guān)。正常妊娠隨著妊娠進展，孕婦血小板活化程度逐漸加強，而妊娠期高血壓疾病的血小板活化更加明顯，血液處于病理性的高凝狀態(tài)，血液流變學(xué)明顯異常，且與病情嚴重程度成正比。

2、導(dǎo)致妊娠高血壓疾病凝血功能異常的原因及機制至今仍不清楚，多年來一直是產(chǎn)科學(xué)者探究的課題之一。溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid，LPA)是近幾年研究較多的一種細胞間磷脂類信號分子，可通過G蛋白耦聯(lián)受體發(fā)揮廣泛而多樣的生物學(xué)功能。研究發(fā)現(xiàn)血液中的LPA可以來源于活化的血小板，而血小板的活化聚集促使血栓形成，因此LPA在缺血性腦卒中的診斷及中風(fēng)預(yù)警方面中有重要的價值。而妊娠期高血壓疾病患者存在明顯的凝血功能異常，患者血中

3、是否存在LPA的異常變化，其變化與妊娠高血壓疾病的關(guān)系如何，以及LPA與血液凝固異常的關(guān)系及作用機制等等問題都是非常值得探討的課題。本文通過對60例妊娠期高血壓疾病患者血漿LPA水平進行檢測，并與正常晚期妊娠孕婦進行對比，以分析LPA在妊娠期高血壓疾病患者血漿中的變化，以及LPA與該病發(fā)生、發(fā)展、病情嚴重程度及預(yù)后的關(guān)系。同時應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測70例妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中LPA受體——內(nèi)皮分化基因(endothelial di

4、fferentiation geile，Edg)蛋白Edg4和Edg7的表達情況，以初步探討ISPA在妊娠期高血壓疾病的作用機制，該研究內(nèi)容國內(nèi)外尚未見報道。 材料與方法 1．選取2005年10月～2006年2月在鄭州大學(xué)一附院、三附院、鄭州市婦幼保健院診治的妊娠期高血壓疾病患者60例(妊娠期高血壓20例，子癇前期輕度20例，子癇前期重度20例)、20例正常晚期妊娠孕婦作為研究對象。收集70例妊娠期高血壓疾病患者的胎盤檢

5、測LPA受體。 2．采用生化法檢測各組患者血漿LPA水平：取患者空腹靜脈血約4ml，按LPA測定試劑說明的步驟先將血液置于抗凝管中，8000r/min離心10min，準確吸取上清液1ml，然后抽提磷脂成分，濃縮分離，最后加入特定顯色劑后置于90℃水浴放置5min，取出后溫室放置35min，在波長為636nm處比色。LPA測定試劑由北京泰福仕科技開發(fā)公司生產(chǎn)，方法為生化法，儀器采用722型分光光度計。參考值范圍：正常<2．9 μ

6、mol/L，臨界值2．9～3．2μ mol/L，異常>3．2μ mol/L。 3．應(yīng)用免疫組織化學(xué)(SP法)檢測該70例妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織(妊娠高血壓疾病組)和20例正常妊娠胎盤組織(對照組)中LPA受體Edg4與Edg7的表達情況，并對結(jié)果進行統(tǒng)計分析，并用Shimizu法對其進行定量分析。 4．統(tǒng)計學(xué)處理：用統(tǒng)計軟件SPSS11.0進行統(tǒng)計分析，測定結(jié)果以x±s表示，采用單因素方差分析、最小顯著差(LSD)

7、t檢驗及x<'2>檢驗進行統(tǒng)計處理，受體表達強度采用校正x<'2>檢驗方法，以α=0.05為檢驗標準。 結(jié)果 1．妊娠期高血壓疾病患者血漿LPA水平測定 1．1 LPA水平測試結(jié)果20例正常晚期妊娠婦女的血漿LPA平均值為(3．5±0．3)μ mol/L，大于臨界值3．2 μ mol/L，較正常非孕婦女升高，P<0.05；妊娠期高血壓疾病組血漿LPA水平明顯升高，妊娠期高血壓組(4．6±0．4)μ mol/L、子

8、癇前期輕度組(6．1±0．4)μmol/L、子癇前期重度組(9．0±0．6)μ mol/L與正常晚期妊娠婦女相比，P值均<0.05，并且隨著妊娠期高血壓疾病病情加重，血漿LPA水平進一步升高，具有顯著差異，組內(nèi)P值均<0.05。 1．2 LPA與新生兒體重、阿氏評分及預(yù)后： 從試驗結(jié)果、統(tǒng)計分析及臨床資料來看，妊娠期高血壓疾病孕婦血漿LPA越高，患者病情越重，表現(xiàn)為血壓持續(xù)升高，藥物治療效果越差，胎兒宮內(nèi)窘迫、胎兒發(fā)育遲

9、緩的發(fā)生率越高，常需提前終止妊娠。新生兒低體重率高，阿氏評分降低，新生兒死亡率增高。我們測定的結(jié)果提示：當(dāng)LPA升高至4．40μ mol/L，是發(fā)生妊娠期高血壓疾病的臨界值；當(dāng)LPA達到5.60μmol/L時妊娠期高血壓疾病多己處于子癇前期輕度階段，應(yīng)及時采取措施予以治療；當(dāng)LPA達到8.50μmol/L，多數(shù)患者已發(fā)展到子癇前期重度階段；當(dāng)LPA超過9.30μmol/時，提示病情嚴重，藥物治療效果不佳，應(yīng)及時終止妊娠，以降低圍生兒和孕

10、產(chǎn)婦死亡率。 2.溶血磷脂酸(LPA)受體在胎盤組織中的表達情況 2.1表達部位：Edg4與Edg7主要表達于胎盤絨毛滋養(yǎng)細胞及蛻膜細胞的細胞質(zhì)和細胞膜，免疫組化染色呈淺黃色或棕黃色。 2.2 Edg4和Edg7在胎盤絨毛滋養(yǎng)細胞中的表達陽性率：正常晚孕組分別為25﹪和20﹪，妊娠期高血壓組分別為60﹪和40﹪，輕度子癇前期組分別為80﹪和65﹪，重度子癇前期組分別為83.3﹪和86.7﹪。輕度子癇前期組及重度

11、子癇前期組陽性率明顯高于正常晚孕組，兩組分別比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05，Edg4:x<'2>17.014；Edg7：x<'2>=22.222)：妊娠期高血壓組與正常晚孕組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，Edg4：x<'2>=5.013：Edg7：x<'2>=1.905)；妊娠期高血壓組、輕度子癇前期組及重度子癇前期組Edg4、Edg7的陽性表達率隨病情加重逐漸升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 2.3 E

12、dg4和Edg7在胎盤蛻膜細胞中的表達陽性率：正常晚孕組分別為20﹪和25﹪，妊娠期高血壓組分別為55﹪和50﹪，輕度子癇前期組分別為70﹪和55﹪，重度子癇前期組分別為83.3﹪和73.3﹪。輕度子癇前期組及重度子癇前期組陽性率明顯高于正常晚孕組，兩組分別比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，Edg4：x<'2>=13.675；Edg7：x<'2>=17.014)；妊娠期高血壓組與正常晚孕組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，Edg

13、4：x<'2>=5.227；Edg7.x<'2>=2.667)；妊娠高血壓組、輕度子癇前期組及重度子癇前期組Edg4、Edg7的陽性表達率隨病情加重逐漸升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論 1.妊娠期高血壓疾病患者血漿LPA水平明顯升高，高于正常妊娠婦女。且與病情有關(guān)，LPA水平越高，提示病情越重。 2.妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中溶血磷脂酸受體蛋白Edg4、Edg7呈高表達。且其表達程度與病情有關(guān)