溶血磷脂酸及其受體在妊娠期高血壓疾病的變化及意義.pdf

1、背景和目的 妊娠期高血壓疾病是影響妊娠預(yù)后最常見(jiàn)的妊娠期特有疾病，直接威脅母體及胎兒的生命安全，是孕產(chǎn)婦和圍生兒病率及死亡率的主要原因。迄今為止，妊娠期高血壓疾病的病因及病理機(jī)制尚不清楚，目前多認(rèn)為其發(fā)病機(jī)制可能與血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、自身免疫、凝血系統(tǒng)及纖溶系統(tǒng)失調(diào)等有關(guān)。正常妊娠隨著妊娠進(jìn)展，孕婦血小板活化程度逐漸加強(qiáng)，而妊娠期高血壓疾病的血小板活化更加明顯，血液處于病理性的高凝狀態(tài)，血液流變學(xué)明顯異常，且與病情嚴(yán)重程度成正比。

2、導(dǎo)致妊娠高血壓疾病凝血功能異常的原因及機(jī)制至今仍不清楚，多年來(lái)一直是產(chǎn)科學(xué)者探究的課題之一。溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid，LPA)是近幾年研究較多的一種細(xì)胞間磷脂類信號(hào)分子，可通過(guò)G蛋白耦聯(lián)受體發(fā)揮廣泛而多樣的生物學(xué)功能。研究發(fā)現(xiàn)血液中的LPA可以來(lái)源于活化的血小板，而血小板的活化聚集促使血栓形成，因此LPA在缺血性腦卒中的診斷及中風(fēng)預(yù)警方面中有重要的價(jià)值。而妊娠期高血壓疾病患者存在明顯的凝血功能異常，患者血中

3、是否存在LPA的異常變化，其變化與妊娠高血壓疾病的關(guān)系如何，以及LPA與血液凝固異常的關(guān)系及作用機(jī)制等等問(wèn)題都是非常值得探討的課題。本文通過(guò)對(duì)60例妊娠期高血壓疾病患者血漿LPA水平進(jìn)行檢測(cè)，并與正常晚期妊娠孕婦進(jìn)行對(duì)比，以分析LPA在妊娠期高血壓疾病患者血漿中的變化，以及LPA與該病發(fā)生、發(fā)展、病情嚴(yán)重程度及預(yù)后的關(guān)系。同時(shí)應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)70例妊娠期高血壓疾病患者胎盤(pán)組織中LPA受體——內(nèi)皮分化基因(endothelial di

4、fferentiation geile，Edg)蛋白Edg4和Edg7的表達(dá)情況，以初步探討ISPA在妊娠期高血壓疾病的作用機(jī)制，該研究?jī)?nèi)容國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。 材料與方法 1．選取2005年10月～2006年2月在鄭州大學(xué)一附院、三附院、鄭州市婦幼保健院診治的妊娠期高血壓疾病患者60例(妊娠期高血壓20例，子癇前期輕度20例，子癇前期重度20例)、20例正常晚期妊娠孕婦作為研究對(duì)象。收集70例妊娠期高血壓疾病患者的胎盤(pán)檢

5、測(cè)LPA受體。 2．采用生化法檢測(cè)各組患者血漿LPA水平：取患者空腹靜脈血約4ml，按LPA測(cè)定試劑說(shuō)明的步驟先將血液置于抗凝管中，8000r/min離心10min，準(zhǔn)確吸取上清液1ml，然后抽提磷脂成分，濃縮分離，最后加入特定顯色劑后置于90℃水浴放置5min，取出后溫室放置35min，在波長(zhǎng)為636nm處比色。LPA測(cè)定試劑由北京泰福仕科技開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn)，方法為生化法，儀器采用722型分光光度計(jì)。參考值范圍：正常<2．9 μ

6、mol/L，臨界值2．9～3．2μ mol/L，異常>3．2μ mol/L。 3．應(yīng)用免疫組織化學(xué)(SP法)檢測(cè)該70例妊娠期高血壓疾病患者胎盤(pán)組織(妊娠高血壓疾病組)和20例正常妊娠胎盤(pán)組織(對(duì)照組)中LPA受體Edg4與Edg7的表達(dá)情況，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并用Shimizu法對(duì)其進(jìn)行定量分析。 4．統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS11.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，測(cè)定結(jié)果以x±s表示，采用單因素方差分析、最小顯著差(LSD)

7、t檢驗(yàn)及x<'2>檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，受體表達(dá)強(qiáng)度采用校正x<'2>檢驗(yàn)方法，以α=0.05為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果 1．妊娠期高血壓疾病患者血漿LPA水平測(cè)定 1．1 LPA水平測(cè)試結(jié)果20例正常晚期妊娠婦女的血漿LPA平均值為(3．5±0．3)μ mol/L，大于臨界值3．2 μ mol/L，較正常非孕婦女升高，P<0.05；妊娠期高血壓疾病組血漿LPA水平明顯升高，妊娠期高血壓組(4．6±0．4)μ mol/L、子

8、癇前期輕度組(6．1±0．4)μmol/L、子癇前期重度組(9．0±0．6)μ mol/L與正常晚期妊娠婦女相比，P值均<0.05，并且隨著妊娠期高血壓疾病病情加重，血漿LPA水平進(jìn)一步升高，具有顯著差異，組內(nèi)P值均<0.05。 1．2 LPA與新生兒體重、阿氏評(píng)分及預(yù)后： 從試驗(yàn)結(jié)果、統(tǒng)計(jì)分析及臨床資料來(lái)看，妊娠期高血壓疾病孕婦血漿LPA越高，患者病情越重，表現(xiàn)為血壓持續(xù)升高，藥物治療效果越差，胎兒宮內(nèi)窘迫、胎兒發(fā)育遲

9、緩的發(fā)生率越高，常需提前終止妊娠。新生兒低體重率高，阿氏評(píng)分降低，新生兒死亡率增高。我們測(cè)定的結(jié)果提示：當(dāng)LPA升高至4．40μ mol/L，是發(fā)生妊娠期高血壓疾病的臨界值；當(dāng)LPA達(dá)到5.60μmol/L時(shí)妊娠期高血壓疾病多己處于子癇前期輕度階段，應(yīng)及時(shí)采取措施予以治療；當(dāng)LPA達(dá)到8.50μmol/L，多數(shù)患者已發(fā)展到子癇前期重度階段；當(dāng)LPA超過(guò)9.30μmol/時(shí)，提示病情嚴(yán)重，藥物治療效果不佳，應(yīng)及時(shí)終止妊娠，以降低圍生兒和孕

10、產(chǎn)婦死亡率。 2.溶血磷脂酸(LPA)受體在胎盤(pán)組織中的表達(dá)情況 2.1表達(dá)部位：Edg4與Edg7主要表達(dá)于胎盤(pán)絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞及蛻膜細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，免疫組化染色呈淺黃色或棕黃色。 2.2 Edg4和Edg7在胎盤(pán)絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá)陽(yáng)性率：正常晚孕組分別為25﹪和20﹪，妊娠期高血壓組分別為60﹪和40﹪，輕度子癇前期組分別為80﹪和65﹪，重度子癇前期組分別為83.3﹪和86.7﹪。輕度子癇前期組及重度

11、子癇前期組陽(yáng)性率明顯高于正常晚孕組，兩組分別比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05，Edg4:x<'2>17.014；Edg7：x<'2>=22.222)：妊娠期高血壓組與正常晚孕組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，Edg4：x<'2>=5.013：Edg7：x<'2>=1.905)；妊娠期高血壓組、輕度子癇前期組及重度子癇前期組Edg4、Edg7的陽(yáng)性表達(dá)率隨病情加重逐漸升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 2.3 E

12、dg4和Edg7在胎盤(pán)蛻膜細(xì)胞中的表達(dá)陽(yáng)性率：正常晚孕組分別為20﹪和25﹪，妊娠期高血壓組分別為55﹪和50﹪，輕度子癇前期組分別為70﹪和55﹪，重度子癇前期組分別為83.3﹪和73.3﹪。輕度子癇前期組及重度子癇前期組陽(yáng)性率明顯高于正常晚孕組，兩組分別比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，Edg4：x<'2>=13.675；Edg7：x<'2>=17.014)；妊娠期高血壓組與正常晚孕組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，Edg

13、4：x<'2>=5.227；Edg7.x<'2>=2.667)；妊娠高血壓組、輕度子癇前期組及重度子癇前期組Edg4、Edg7的陽(yáng)性表達(dá)率隨病情加重逐漸升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論 1.妊娠期高血壓疾病患者血漿LPA水平明顯升高，高于正常妊娠婦女。且與病情有關(guān)，LPA水平越高，提示病情越重。 2.妊娠期高血壓疾病患者胎盤(pán)組織中溶血磷脂酸受體蛋白Edg4、Edg7呈高表達(dá)。且其表達(dá)程度與病情有關(guān)