海綿和海鞘中可培養(yǎng)放線菌多樣性的比較研究.pdf

1、放線菌是一類具有重要工業(yè)價值的細(xì)菌，目前約70％的抗生素類化合物都生產(chǎn)自放線菌。海綿能夠產(chǎn)生大量具有藥用價值的天然活性物質(zhì)，具有抗菌、抗腫瘤、抗病毒等生理活性。其中很多活性物質(zhì)由海綿相關(guān)微生物產(chǎn)生，這些微生物占海綿干重的40-70％，且種類繁多。對海綿相關(guān)微生物的大規(guī)模培養(yǎng)可以解決海綿藥源供給不足的問題。海鞘中含有許多重要的生物活性物質(zhì)，是除海綿以外人類獲取藥用天然產(chǎn)物的重要資源。但其相關(guān)微生物的研究報道很有限，極少涉及相關(guān)放線菌的多樣

2、性。因此，在活躍的海綿相關(guān)放線菌多樣性的研究狀態(tài)下，對海鞘相關(guān)放線菌多樣性的研究是一項具有重要意義的課題。
　　 本文采用5種放線菌分離培養(yǎng)基和1種細(xì)菌通用培養(yǎng)基，在相同的分離培養(yǎng)條件下，對采集于地域差別較大的福建海域山海綿（Mycale sp.）、網(wǎng)架海綿(Stylisssp.)和海南海域皺瘤海鞘（Styela plicata）和乳突皮海鞘（Molgula manhattensis）中可培養(yǎng)放線菌進(jìn)行分離，采用16S rDNA

3、限制性片段長度多態(tài)性(RestrictionFragment Length Polymorphism，RFLP)分析和序列分析，比較其多樣性的差異。獲得的多樣性結(jié)果為分離出新穎放線菌，篩選具有活性的特殊菌株提供了重要的參考資料。具體研究結(jié)果如下:
　　 用所選的6種培養(yǎng)基成功獲得了豐富的微生物資源。共分離放線菌198株，其中從山海綿中分離得到51株，網(wǎng)架海綿36株;從皺瘤海鞘中分離得到80株，乳突皮海鞘31株。海綿和海鞘在培養(yǎng)基

4、M2中分離出最多的放線菌。
　　 多樣性分析采用RFLP結(jié)合16S rDNA測序的方法，獲得38個放線菌RFLP圖譜類型。比較兩種采集于中國福建海域的兩種海綿（山海綿和網(wǎng)架海綿）相關(guān)放線菌多樣性的差異，菌株的測序分析表明，山海綿中分離得到的放線菌包括鏈霉菌、擬諾卡氏菌、節(jié)細(xì)菌、戈登菌和細(xì)桿菌，共5個屬。從網(wǎng)架海綿中分離到鏈霉菌和短桿菌2個屬，鏈霉菌屬具有顯著優(yōu)勢。與首次被研究的網(wǎng)架海綿相關(guān)放線菌多樣性水平相比，山海綿中分離得到的

5、放線菌不但數(shù)量明顯多于網(wǎng)架海綿，在種屬分布上也更廣泛。海綿來源的放線菌中有4株菌的16S rDNA序列與最相近的菌株相似性低于97％，可能是潛在的新菌株。
　　 而比較兩種采集于中國海南海域的兩種海鞘（皺瘤海鞘和乳突皮海鞘）之間相關(guān)放線菌多樣性，從皺瘤海鞘中分離出6個放線菌屬:鏈霉菌、擬諾卡氏菌、戈登菌、細(xì)桿菌、短桿菌和紅球菌。從乳突皮海鞘中分離出優(yōu)勢菌屬鏈霉菌屬和小單孢菌屬。皺瘤海鞘中分離得到的放線菌多樣性明顯高于乳突皮海鞘，