中華蜂內(nèi)共生放線菌的分離、多樣性及抗菌活性研究.pdf

1、放線菌是一類具有重大實用價值的微生物資源。因其能產(chǎn)生豐富的生物活性物質(zhì)如:抗生素、酶抑制劑、有機酸、維生素等，使其在醫(yī)藥領(lǐng)域、農(nóng)業(yè)領(lǐng)域、食品領(lǐng)域等有著極為廣泛的應用。所以探索新型的能產(chǎn)生良好生物活性物質(zhì)的放線菌資源是進行放線菌研究的重要內(nèi)容。昆蟲是自然界中種類最多的生物種群，且其都有與微生物共生的現(xiàn)象，可以預見昆蟲體內(nèi)放線菌在種類和功能上都會具有豐富的多樣性。然而目前人們對昆蟲內(nèi)共生放線菌資源的探索還較少，因此具有很大的開發(fā)潛力。本實驗

2、以中華蜂(Apis cerana cerana Fabricius)作為研究對象，目的在于探索中華蜂可培養(yǎng)內(nèi)共生放線菌的分離方法，研究其內(nèi)共生放線菌的物種多樣性和抗菌活性，挖掘更多有價值的微生物資源。
　　本實驗選用以濃度為0.2％的ClO2（二氧化氯）為消毒劑作用60s的表面消毒方法，采用7種不同的分離培養(yǎng)基對中華蜂體內(nèi)放線菌進行分離，共計得到161株菌，其中腐殖酸HV培養(yǎng)基培養(yǎng)出了48株菌，分出的菌株數(shù)量居于首位，而稀有放線菌

3、出菌率最高的為M7培養(yǎng)基。根據(jù)菌落的形態(tài)和細胞特征觀察結(jié)果，從分離得到的161株內(nèi)共生放線菌中選取84株代表菌株進行多樣性和抗菌活性研究。
　　對84株代表菌株，選用HhaⅠ、HaeⅢ、MspⅠ、HinfⅠ四種限制性內(nèi)切酶進行16S rRNA-RFLP分析，酶切后形成18種16S rRNA遺傳類型，樹狀圖顯示代表菌株在57％的相似性上聚在一起，在93％的相似水平上，代表菌株分成了10個遺傳群，其中群2為優(yōu)勢菌群，包含50株菌。綜合

4、菌株形態(tài)特征和16S rRNA基因酶切圖譜分析，從10個遺傳群中選取了16株代表菌株測定16S rRNA基因序列，結(jié)果表明從中華蜂樣品中分離得到的放線菌分屬于3個目、4個科中的4個屬，包括鏈霉菌亞目(Suborder Streptomycineae)中鏈霉菌科(Streptomycetaceae)的鏈霉菌屬(Streptomyces);小單孢菌亞目(Suborder Micromonosporineae)中小單孢菌科(Micromono

5、sporacea)的小單孢菌屬(Micromonospora);棒桿菌亞目(Suborder Corynebacterineae)中戈登氏菌科(Gordoniaceae)的戈登氏菌屬(Gordonia)和擬諾卡氏菌科(Nocardiopsaceae)的擬諾卡氏菌屬(Nocardiopsis)。SCAUEB4、SCAUED23、SCAUEB32這3株為潛在新種，需進一步研究。
　　選用2種病原真菌和2種病原細菌對84株代表菌株進行抗

6、菌活性初探，結(jié)果表明31.0％、48.8％、27.4％、16.7％的代表菌株分別對大腸桿菌(Escherichia coli)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、玉米彎孢病菌(Curvullaria lunata)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)有不同程度的抗菌活性，71.4％的代表菌株對至少1種病原菌展現(xiàn)出抑菌效果，而其中的14.3％對3種及3種以上的病原菌表現(xiàn)出了不同程度抑菌效果，展現(xiàn)出了廣譜