蜂王漿主蛋白(MRJPs)替代牛血清(FBS)培養(yǎng)人體細胞應用技術研究.pdf

1、蜂王漿(royal jelly，RJ)是由5～15日齡成年工蜂咽下腺、上顎腺和腦后腺分泌的粘稠狀物質，營養(yǎng)豐富，是蜂王的終生食物，對人體具有多種營養(yǎng)保健功能。新鮮蜂王漿含水分60～70％、蛋白質12～15％、碳水化合物10％～16％、脂類3％～6％，以及少量維生素、礦物質、游離氨基酸等。MRJPs(major royal jellyproteins)是蜂王漿中水溶性蛋白的總稱，約占王漿總蛋白的82％～90％。近年研究證明，MRJPs是決

2、定蜜蜂發(fā)育為蜂王的關鍵活性成分。本文研究了MRJPs對5種人體細胞的促生長作用及初步作用機理，MRJPs與胎牛血清(fetal bovineserum，F(xiàn)BS)及細胞因子復配和替代FBS培養(yǎng)人體細胞的應用技術，以及進一步添加細胞生長因子的效果。
　　1.MRJPs對Chang Lvier細胞的促增殖作用及作用機理將MRJPs添加到細胞培養(yǎng)基，用MTT法比較純MRJPs與FBS、不同MRJPs/FBS比例對張氏肝細胞(Chang L

3、iver)增殖的影響，再用流式細胞儀檢測MRJPs各處理對細胞周期的影響。結果表明:僅添加MRJPs不能促進細胞增殖，完全培養(yǎng)基(10％ FBS)中MRJPs的最佳添加量為0.5 mg/mL; MRJPs(5 mg/mL)/FBS的添加比例為60/40的混合培養(yǎng)基的效果最佳，其對細胞的促增殖作用與完全培養(yǎng)基相比無顯著差異(p＜0.05)。流式細胞儀檢測顯示，MRJPs與FBS配合使用可促使細胞S期及G0/G1期比例增大，推測其作用可能與

4、促進DNA合成、前期RNA和核糖體合成有關。
　　2.MRJPs與胎牛血清復配對4種人體細胞的促生長作用用初始濃度為5 mg/mL的MRJPs母液，按不同比例(30％、60％、90％)替代FBS添加到培養(yǎng)基中培養(yǎng)293T、HCT116、231及HFL-Ⅰ細胞。以10％FBS為陽性對照組、10％PBS為陰性對照組，5～8天后用MTT法檢測各處理的相對活細胞數(shù)。結果顯示，適用于Chang Liver細胞的最佳MRJPs/FBS比例(6

5、0/40)也適用于293T、HCT116及HFL-Ⅰ細胞，用該比例配方血清培養(yǎng)的三種細胞相對活細胞數(shù)最高，與全FBS培養(yǎng)無顯著差異，或顯著高于全FBS組。然而，該復合血清對231細胞無顯著促增殖效果，第5天時的相對活細胞數(shù)僅占全FBS的34.4％，說明該復合血清對細胞的促增殖作用對細胞具有選擇性。
　　3.MRJPs/FBS復合血清中添加細胞因子對5種人體細胞的促生長作用在比例為60/40的MRJPs/FBS復合血清中添加不同組合

6、形式的表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF)、胰島素鐵硒傳遞蛋白(Insulin-Transferrin-Selenium，ITS)及地塞米松（Dexamethasone，DSMS），用于培養(yǎng)Chang Liver、293T、HCT116、231及HFL-Ⅰ細胞，其中FBS為陽性對照（不含細胞生長因子），不含細胞生長因子的MRJPs/FBS復合血清為陰性對照。3～8天后用MTT法檢測相對活細胞數(shù)。結果顯示

7、，復合血清中添加EGF和ITS的混合物能顯著促進Chang Liver、293T、HCT116及HFL-Ⅰ細胞增殖（相對于陰性對照組），同時這些細胞株的相對活細胞數(shù)均顯著大于陽性對照組(FBS);復合血清中添加DSMS對各種細胞均無顯著促增殖作用;添加細胞因子也不能促進231細胞增殖，其相對活細胞數(shù)低于陽性對照組(FBS)50％，且細胞不能正常貼壁。
　　本研究證明，MRJPs可部分替代FBS用于人體細胞培養(yǎng)，具有促生長活性;篩選