蜂王漿主蛋白(MRJPs)替代牛血清(FBS)培養(yǎng)人體細(xì)胞應(yīng)用技術(shù)研究.pdf

1、蜂王漿(royal jelly，RJ)是由5～15日齡成年工蜂咽下腺、上顎腺和腦后腺分泌的粘稠狀物質(zhì)，營(yíng)養(yǎng)豐富，是蜂王的終生食物，對(duì)人體具有多種營(yíng)養(yǎng)保健功能。新鮮蜂王漿含水分60～70％、蛋白質(zhì)12～15％、碳水化合物10％～16％、脂類3％～6％，以及少量維生素、礦物質(zhì)、游離氨基酸等。MRJPs(major royal jellyproteins)是蜂王漿中水溶性蛋白的總稱，約占王漿總蛋白的82％～90％。近年研究證明，MRJPs是決

2、定蜜蜂發(fā)育為蜂王的關(guān)鍵活性成分。本文研究了MRJPs對(duì)5種人體細(xì)胞的促生長(zhǎng)作用及初步作用機(jī)理，MRJPs與胎牛血清(fetal bovineserum，F(xiàn)BS)及細(xì)胞因子復(fù)配和替代FBS培養(yǎng)人體細(xì)胞的應(yīng)用技術(shù)，以及進(jìn)一步添加細(xì)胞生長(zhǎng)因子的效果。
　　1.MRJPs對(duì)Chang Lvier細(xì)胞的促增殖作用及作用機(jī)理將MRJPs添加到細(xì)胞培養(yǎng)基，用MTT法比較純MRJPs與FBS、不同MRJPs/FBS比例對(duì)張氏肝細(xì)胞(Chang L

3、iver)增殖的影響，再用流式細(xì)胞儀檢測(cè)MRJPs各處理對(duì)細(xì)胞周期的影響。結(jié)果表明:僅添加MRJPs不能促進(jìn)細(xì)胞增殖，完全培養(yǎng)基(10％ FBS)中MRJPs的最佳添加量為0.5 mg/mL; MRJPs(5 mg/mL)/FBS的添加比例為60/40的混合培養(yǎng)基的效果最佳，其對(duì)細(xì)胞的促增殖作用與完全培養(yǎng)基相比無(wú)顯著差異(p＜0.05)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，MRJPs與FBS配合使用可促使細(xì)胞S期及G0/G1期比例增大，推測(cè)其作用可能與

4、促進(jìn)DNA合成、前期RNA和核糖體合成有關(guān)。
　　2.MRJPs與胎牛血清復(fù)配對(duì)4種人體細(xì)胞的促生長(zhǎng)作用用初始濃度為5 mg/mL的MRJPs母液，按不同比例(30％、60％、90％)替代FBS添加到培養(yǎng)基中培養(yǎng)293T、HCT116、231及HFL-Ⅰ細(xì)胞。以10％FBS為陽(yáng)性對(duì)照組、10％PBS為陰性對(duì)照組，5～8天后用MTT法檢測(cè)各處理的相對(duì)活細(xì)胞數(shù)。結(jié)果顯示，適用于Chang Liver細(xì)胞的最佳MRJPs/FBS比例(6

5、0/40)也適用于293T、HCT116及HFL-Ⅰ細(xì)胞，用該比例配方血清培養(yǎng)的三種細(xì)胞相對(duì)活細(xì)胞數(shù)最高，與全FBS培養(yǎng)無(wú)顯著差異，或顯著高于全FBS組。然而，該復(fù)合血清對(duì)231細(xì)胞無(wú)顯著促增殖效果，第5天時(shí)的相對(duì)活細(xì)胞數(shù)僅占全FBS的34.4％，說(shuō)明該復(fù)合血清對(duì)細(xì)胞的促增殖作用對(duì)細(xì)胞具有選擇性。
　　3.MRJPs/FBS復(fù)合血清中添加細(xì)胞因子對(duì)5種人體細(xì)胞的促生長(zhǎng)作用在比例為60/40的MRJPs/FBS復(fù)合血清中添加不同組合

6、形式的表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor，EGF)、胰島素鐵硒傳遞蛋白(Insulin-Transferrin-Selenium，ITS)及地塞米松（Dexamethasone，DSMS），用于培養(yǎng)Chang Liver、293T、HCT116、231及HFL-Ⅰ細(xì)胞，其中FBS為陽(yáng)性對(duì)照（不含細(xì)胞生長(zhǎng)因子），不含細(xì)胞生長(zhǎng)因子的MRJPs/FBS復(fù)合血清為陰性對(duì)照。3～8天后用MTT法檢測(cè)相對(duì)活細(xì)胞數(shù)。結(jié)果顯示

7、，復(fù)合血清中添加EGF和ITS的混合物能顯著促進(jìn)Chang Liver、293T、HCT116及HFL-Ⅰ細(xì)胞增殖（相對(duì)于陰性對(duì)照組），同時(shí)這些細(xì)胞株的相對(duì)活細(xì)胞數(shù)均顯著大于陽(yáng)性對(duì)照組(FBS);復(fù)合血清中添加DSMS對(duì)各種細(xì)胞均無(wú)顯著促增殖作用;添加細(xì)胞因子也不能促進(jìn)231細(xì)胞增殖，其相對(duì)活細(xì)胞數(shù)低于陽(yáng)性對(duì)照組(FBS)50％，且細(xì)胞不能正常貼壁。
　　本研究證明，MRJPs可部分替代FBS用于人體細(xì)胞培養(yǎng)，具有促生長(zhǎng)活性;篩選