蜂王漿主蛋白(MRJPs)超濾分離及重組抗菌肽Royalisin利用技術(shù)研究.pdf

1、蜂王漿是由蜜蜂工蜂咽下腺、上顎腺和腦后腺等腺體（王漿腺）分泌的乳狀物質(zhì)，是1～3日齡工蜂幼蟲及蜂王的終生食料，它含有豐富的生物活性成分，具有多種生理活性和營養(yǎng)保健功能。近年來，蜂王漿蛋白，尤其是王漿主蛋白(MRJPs)逐漸成為新的研究熱點(diǎn)。本文主要開展了蜂王漿的主要功能蛋白—MRJPs和抗菌肽royalisin的分離、生物活性檢測及應(yīng)用研究。主要結(jié)果如下:
　　一、重組royalisin發(fā)酵與ELISA定量檢測
　　為充分利

2、用重組抗菌肽royalisin，用royalisin多克隆抗體建立了royalisin的ELISA快速檢測方法，并將該方法用于測定不同培養(yǎng)溫度下royalisin的產(chǎn)量，獲得最佳培養(yǎng)溫度。結(jié)果表明:在27℃條件下，得率為3.01mg/L，大于實(shí)驗(yàn)窒之前產(chǎn)率（1.5mg/L）。為進(jìn)一步發(fā)酵生產(chǎn)提供了重要依據(jù)。
　　將不同蜂種的血淋巴、蜂王漿凍干粉作為抗原，用建立的ELISA方法檢測樣品吸光度，代入所建回歸方程，計(jì)算得到各樣品中的ro

3、yalisin的量。證實(shí)中華蜜蜂的抗病性（即royalisin含量）強(qiáng)（多）于意蜂。
　　二、用MRJP1多克隆抗體ELISA快速檢測蜂王漿新鮮度
　　建立了以MRJP1多克隆抗體為一抗的ELISA快速檢測蜂王漿新鮮度的方法。將鮮王漿放入40℃恒溫箱，分別在0、7、14、21、28、35、42和49天取樣用ELISA法檢測MRJP1含量。結(jié)果證明，MRJP1在儲(chǔ)存中明顯降解。同時(shí)通過SDS-PAGE分析進(jìn)行了驗(yàn)證。
　

4、　三、蜂王漿中MRJPs的超濾分離
　　以MRJPs提取率為考核指標(biāo)，分別考察pH、離子強(qiáng)度和水料比三個(gè)單因素對(duì)MRJPs提取率的影響;然后通過進(jìn)行4因素3水平正交試驗(yàn)和統(tǒng)計(jì)，獲得最佳工藝參數(shù);最后進(jìn)行最佳工藝驗(yàn)證，產(chǎn)物凍干粉MRJPs蛋白鑒定，測定副產(chǎn)物中總糖和王漿酸(10-HDA)的回收利用率。測得在最優(yōu)條件，即:水料比5∶1(mL/g)，離子強(qiáng)度0.5(mol/L)，pH7，MRJPs提取率為82.63％。且此時(shí)濾后液的總糖