基于α--FR的配體探針PCR檢測腎細胞癌患者循環(huán)腫瘤細胞的臨床意義.pdf

1、南方醫(yī)科大學2011級碩士學位論文基于Q—FR的配體探針PCR檢測腎細胞癌患者循環(huán)腫瘤細胞的臨床意義PreliminaryInvestigationoftheClinicalSignificanceofDetectingCirculatingTumorCellsfromRenalCellsCarcinomaPatientsthrough‘‘LigandProbe’’PCRbasedon僅FR課題來源：自選課題學位申請人導師姓名專業(yè)名稱培

2、養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學院張磊劉春曉外科學(泌尿外科)專業(yè)型醫(yī)學碩士第二臨床醫(yī)學院2014年5月12日廣州摘要酸組成，分子量約38kDa。其在J下常上皮細胞中表達極其有限，而在上皮來源的惡性腫瘤中過度表達；文獻報道超過75％的RCC其C【FR呈高度表達。目前有關腎細胞癌CTCs的研究相對較少，主要原因在于檢測手段的限制；例如常見的RTPCR，CellSearch系統(tǒng)及流式細胞儀等CTCs檢測手段并非適合于RCC。因此，本研究在文獻報道的基礎

3、上先從mRNA和蛋白質(zhì)水平檢測0【FR在兩種人腎癌細胞株ACHN、7860中的表達情況；再嘗試采用基于0【一FR的配體探針PCR技術來有效檢測RCC患者外周血CTCs，初步闡述RCC患者外周血CTCs檢測的臨床意義。為RCC患者檢測外周血CTCs提供了一種切實可行的技術手段，國內(nèi)外尚無相關報道。目的：探索基于q—FR的配體探針PCR定量檢測腎細胞癌(RCC)患者外周血循環(huán)腫瘤細胞(CTCs)的可行性，并進一步闡釋該法定量檢測RCC患者外

4、周血CTCs的臨床意義。方法：一：(1)：選擇兩株人腎癌細胞株ACHN、7860，采用含10％FBS的無葉酸培養(yǎng)基RPMI1640常規(guī)培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細胞胰酶消化收集。另取健康志愿者外周血收集白細胞做陰性對照。Trizol提取三種細胞總RNA，常規(guī)凝膠電泳檢測RNA完整性；采用商品化試劑盒(PrimescriptTMRTMasterMixKit)對目的基因(ct—FR)進行特異性擴增，內(nèi)參基因為GAPDH。制作溶解曲線及擴增曲線，采用

5、AAt法行相對定量分析；并紫外燈下觀察凝膠電泳后的擴增產(chǎn)物。(2)：取106的三種細胞提取總蛋白，采用BCA法行蛋白定量檢測，Westernblot法檢測蛋白樣品中QFR的表達情況；GAPDH作內(nèi)參，采用化學發(fā)光法檢測雜交信號，分析表達差異。(3)：為驗證本實驗方法能敏感而有效地從外周血中檢測到CTCs，我們將培養(yǎng)的人腎癌細胞株ACHN進行人工摻血實驗。重懸細胞分為5／ul、50／ul、500／ul、5000／ul和50000／ul五個