H5亞型流感病毒血凝素（H5HA）特異性單克隆抗體庫(kù)的構(gòu)建及H5HA抗原性變異規(guī)律研究.pdf

1、2003年至今，東南亞國(guó)家持續(xù)爆發(fā)H5N1禽流感疫情并隨著候鳥遷移不斷向亞洲、歐洲和非洲國(guó)家擴(kuò)散傳播，各國(guó)養(yǎng)禽業(yè)因此遭受滅頂之災(zāi)，同時(shí)不斷引發(fā)的人感染事件也給各國(guó)公共衛(wèi)生工作帶來(lái)嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。流感病毒由于變異迅速，不斷有新的病毒株出現(xiàn)，導(dǎo)致了對(duì)其監(jiān)控、預(yù)防以及治療存在巨大困難。目前對(duì)H5亞型禽流感病毒的變異規(guī)律研究是當(dāng)前流感病毒研究的一個(gè)熱點(diǎn)，對(duì)分析病毒的變異趨勢(shì)，預(yù)測(cè)全球流感大流行有重要意義。本研究的目的是建立一個(gè)抗H5亞型流感病毒HA蛋

2、白特異性單克隆抗體庫(kù)，并利用該單抗庫(kù)試圖分析H5亞型流感病毒HA蛋白抗原變異規(guī)律。 首先在本實(shí)驗(yàn)室已有研究基礎(chǔ)上，采用A/Ck/HK/Yu22/02(H5N1)作為免疫原，獲得了114株針對(duì)H5亞型流感病毒血凝素(H5 HA)特異性單克隆抗體，構(gòu)建一個(gè)H5單抗庫(kù)。 其次，運(yùn)用分子進(jìn)化分析手段分析了近年來(lái)東南亞各國(guó)流行的H5N1病毒株，挑選出33株能基本覆蓋目前世界主要流行株的變異類型的H5亞型禽流感病毒株作為H5單抗庫(kù)的

3、評(píng)估病毒株。 第三，運(yùn)用評(píng)估病毒株與單抗庫(kù)進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)(HI)分析，發(fā)現(xiàn)H5亞型禽流感病毒HA蛋白中的10個(gè)表位聚集區(qū)，分別被10種不同的單抗類型(M1-M10)所識(shí)別區(qū)分?；?14株H5單抗的HI反應(yīng)譜，挑選其中的16株代表單抗株進(jìn)行中和試驗(yàn)(NT)分析，發(fā)現(xiàn)H5亞型禽流感病毒HA蛋白中的四個(gè)不同的中和表位聚集區(qū)，分別被4類中和單抗(N1-N4)所識(shí)別。 第四，基于H5單抗與33株H5亞型禽流感病毒株的血凝抑制試

4、驗(yàn)圖譜和中和圖譜，開創(chuàng)了一種新的H5N1禽流感病毒抗原性變異分析方法，發(fā)現(xiàn)當(dāng)前流行的H5N1病毒株呈現(xiàn)如下變異規(guī)律：(1)H5N1病毒正處于高度變異期，存在八種變異亞系(A-H)共存的流行現(xiàn)狀；(2)不同H5N1病毒變異株中存在一個(gè)共有的保守表位；(3)H5N1病毒的變異規(guī)律存在明顯的地域差別。同時(shí)利用H5中和單抗panel分析H5N1疫苗候選株的抗原性差別，為今后H5N1禽流感疫苗株的篩選和評(píng)價(jià)提供一種新方法。 第五，對(duì)廣譜單