pMADS3基因兩種干涉載體對矮牽牛遺傳轉(zhuǎn)化的初步研究.pdf

1、矮牽牛作為一種雙子葉植物,既是重要的觀賞植物,又是植物分子生物學(xué)研究的模式植物之一。作為模式植物,矮牽牛除了具有植物分子生物學(xué)研究的優(yōu)點之外,也由于其花器官較大、轉(zhuǎn)化體系完善、便于觀察等特點,近年來成為研究MADS-BOX基因家族的最主要的物種之一。本研究以得到重瓣矮牽牛和發(fā)掘新基因豐富花發(fā)育理論為目的,用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法將一個與花型相關(guān)的MADS-BOX類基因PMADS3及其保守片段PMa以RNAi的形式轉(zhuǎn)化矮牽牛V26以及

2、Blind-like,得到相應(yīng)的Kan抗性株系,隨機抽取相應(yīng)的株系進行PCR鑒定,均出現(xiàn)了陽性條帶,初步斷定目的基因已轉(zhuǎn)入。
　　 主要研究情況如下:
　　 1.優(yōu)化了矮牽牛的高頻再生遺傳轉(zhuǎn)化體系:
　　 優(yōu)化了矮牽牛自交系品種V26及Blind-like的再生遺傳轉(zhuǎn)化體系。
　　 2.以RNAi干涉的形式分別轉(zhuǎn)化基因PMADS3及其保守片段PMa,并獲得相應(yīng)抗性株系若干:
　　 通過根癌農(nóng)桿菌介

3、導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法分別將兩個干涉載體轉(zhuǎn)入兩種矮牽牛材料中,獲得四個Kan抗性轉(zhuǎn)化組合PMADS3&V26；PMADS3&Blind-like;PMa&V26;PMa& Blind-like150、150、80、80個。隨機抽取PMADS3&V26；PMADS3&Blind-likePMa&V26組合株系4；11；16個,經(jīng)PCR檢測分別有4；9；15個株系呈陽性,初步斷定矮牽牛V26、Blind-like轉(zhuǎn)化率分別為93.75％、81.82

4、％。
　　 3.轉(zhuǎn)基因矮牽牛的表型觀察:
　　 將四個組合所得到的轉(zhuǎn)基因植株移栽于田間,對PMADS3&V26組合的33個株系進行觀察,有9株出現(xiàn)了不同程度表型變異。其中,6株出現(xiàn)的變異主要表現(xiàn)為花朵大于對照、花絲上著生花瓣、花瓣增多,絲藥連接處瓣化,自交授粉不結(jié)實。3株出現(xiàn)的變異主要表現(xiàn)為花藥形狀改變:末端變尖；部分花藥轉(zhuǎn)變成花瓣且不能正常開裂。而對PMADS3&Blind-like組合的22個株系進行觀察,有9株出現(xiàn)