水稻BADH2基因RNA干涉表達(dá)載體的構(gòu)建與遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、甜菜堿是植物在鹽、干旱或其它脅迫下在細(xì)胞中迅速積累的一種相容性有機(jī)小分子化合物，它在細(xì)胞中的積累與植物抗鹽性的提高密切相關(guān)。大多數(shù)生物體內(nèi)的甘氨酸甜菜堿的合成需要兩步反應(yīng)。其中，甜菜堿醛脫氫酶(betaine aldehyde dehydrogenase，BADH)催化甜菜堿醛生成甘氨酸甜菜堿。 水稻是世界上重要的糧食作物之一，對(duì)鹽脅迫較敏感。稻田鹽堿化是造成水稻減產(chǎn)的主要環(huán)境因素之一。所以對(duì)水稻耐鹽性的研究和改良是當(dāng)今農(nóng)業(yè)發(fā)展

2、的重要研究課題之一。眾多研究結(jié)果都表明，BADH基因家族和植物的耐鹽性抗旱性有關(guān)。在很多單子葉植物(包括水稻)中，都發(fā)現(xiàn)與雙子葉植物BADH功能相似的兩個(gè)同源基因BADH1及BADH2。推測(cè)這兩個(gè)同源基因也與植物耐鹽抗旱有關(guān)。 本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建了水稻BADH2的RNAi載體，并利用農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導(dǎo)法將其導(dǎo)入多個(gè)水稻品種幼胚、成熟胚誘導(dǎo)的愈傷組織，再生形成完整的轉(zhuǎn)基因水稻植株。實(shí)驗(yàn)表明，

3、不同外植體來(lái)源影響愈傷組織的誘導(dǎo)和轉(zhuǎn)化，并且愈傷組織的誘導(dǎo)和轉(zhuǎn)化效果受基因型的影響。在農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化過(guò)程中，潮霉素和除草劑都是較好的篩選劑，前者篩選所得的抗性愈傷分化成苗所需時(shí)間較短；但后者篩選所得的抗性愈傷形成的苗更健壯。T<,0>代PCR檢測(cè)表明，通過(guò)轉(zhuǎn)化確已獲得一定數(shù)量的轉(zhuǎn)基因植株，為進(jìn)一步研究水稻BADH2基因的功能奠定了基礎(chǔ)。通過(guò)對(duì)陽(yáng)性轉(zhuǎn)化株及對(duì)照株進(jìn)行鹽脅迫試驗(yàn)，比較在相同濃度NaCl脅迫下陽(yáng)性轉(zhuǎn)化株幼苗和野生型對(duì)照幼苗的株高、