小麥TaPHR1基因表達載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、充分挖掘作物高效利用營養(yǎng)元素的遺傳潛力，培育養(yǎng)分高效利用的農(nóng)作物新品種，對農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。本研究以26份優(yōu)良普通小麥主栽品種（系）為材料，對影響小麥成熟胚愈傷組織誘導、分化和轉(zhuǎn)化的因素進行了試驗，進行了磷高效基因TaPHR1高效表達載體的構(gòu)建和遺傳轉(zhuǎn)化研究。獲得的主要研究結(jié)果如下：
　　 1、以植物表達載體pROK2-Ubi為基礎(chǔ)，設(shè)計帶有酶切位點KpnI和BamHI的一對引物，從載體pAC25上擴增到目的基因TaP

2、HR1。酶切回收后與同樣雙酶切的表達載體pROK2-Ubi連接，獲得新的高效表達載體pTaPHR1，并用凍融法將其導入根瘤農(nóng)桿菌LB4404菌株；同時，進一步將表達載體pTaPHR1中的啟動子Ubi換為TaPT2，構(gòu)建了表達載體pTaPHR1-PT2，為農(nóng)桿菌介導的磷高效基因遺傳轉(zhuǎn)化研究奠定了基礎(chǔ)。
　　 2、通過對小麥成熟胚進行愈傷組織誘導及分化再生研究，明確了小麥基因型、吸脹時間、誘愈培養(yǎng)基2，4-D濃度、分化培養(yǎng)基KT濃度

3、等是影響小麥成熟胚愈傷組織形成和分化再生的重要因子。利用剝胚法（embryo-isolated method，EI）誘導小麥成熟胚產(chǎn)生愈傷組織，并進行分化再生培養(yǎng)，篩選出了成熟胚出愈率高、愈傷質(zhì)量好、分化成苗率較高的濟麥22等基因型材料，確定了適宜的吸脹時間（18h）、誘愈（2 mg·L-12，4-D）、分化（5 mg·L-1KT）條件。
　　 3、試驗明確了侵染菌液濃度及侵染時間、高滲處理中蔗糖濃度、Ca2+離子處理、共培養(yǎng)中

4、濾紙?zhí)幚?、共培養(yǎng)時間等因素，對小麥成熟胚愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化效率有較大影響。接種菌液濃度為OD600=0.6，浸染時間為60min時，抗性愈組率達到最大值4.08％；浸染前進行蔗糖高滲處理，當蔗糖濃度75 g·L-1時抗性愈組率最高（濟麥22，2.90％；泰農(nóng)18，2.78％）；侵染后20 mmol/L Ca2+處理，抗性愈組率達到最高（5.05％）；共培養(yǎng)過程中添加濾紙片可以提高轉(zhuǎn)化效率，抗性愈組率達到4.29％；共培養(yǎng)3d，可使抗性愈組