2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁(yè)
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1、葉綠體轉(zhuǎn)化技術(shù)具有諸多優(yōu)點(diǎn),但是該技術(shù)在水稻上的應(yīng)用較少。本實(shí)驗(yàn)中,分別克隆了水稻葉綠體表達(dá)載體的不同元件,以水稻總DNA為模板,PCR擴(kuò)增了葉綠體基因組同源重組片段trnI和trnA,與GenBank中水稻葉綠體基因組比對(duì),同源性分別達(dá)到99.93％和100％;以載體pEGFP-N2為模板,PCR擴(kuò)增了具有3種含不同RBS序列的增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因(egfp);煙草葉綠體啟動(dòng)子Prrn和終止子TpsbA克隆自載體pLM21,與Gen

2、Bank中煙草葉綠體基因組比對(duì),同源性分別達(dá)到97.35％和100％。構(gòu)建了3種能編碼增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)的水稻葉綠體轉(zhuǎn)化載體pIA-EGFP1、pIA-EGFP2和pIA-EGFP3并進(jìn)行了酶切檢測(cè)。將上述所構(gòu)建載體電轉(zhuǎn)入大腸桿菌,觀察了大腸桿菌內(nèi)egfp的表達(dá)情況,結(jié)果顯示,攜帶的RBS來源于(λ)噬菌體T7gene10的5'UTR的載體pIA-EGFP3熒光最強(qiáng)。以載體pCAMBIA1301為模板,PCR擴(kuò)增了RBS為T

3、7gene10的5'UTR的潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(hpt),并將該片段連入了載體pIA-EGFP3,構(gòu)建了載體pIA-EGFP3-HPT,將載體電轉(zhuǎn)入大腸桿菌后檢測(cè)了潮霉素抗性,轉(zhuǎn)化成功的大腸桿菌具有潮霉素抗性。將載體pIA-EGFP3-HPT通過基因槍轟擊洋蔥表皮細(xì)胞,觀察egfp的瞬時(shí)表達(dá),結(jié)果在洋蔥表皮細(xì)胞中觀測(cè)到了明顯的綠色熒光,說明載體pIA-EGFP3-HPT在洋蔥質(zhì)體中成功表達(dá),因此認(rèn)為載體pIA-EGFP3-HPT適合用

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