喉鱗癌及癌旁正常組織中microRNA的差異表達(dá)分析.pdf

1、目的：喉癌的早期診斷及喉鱗癌復(fù)發(fā)的早期判斷對(duì)喉鱗癌的治療至關(guān)重要，而目前人們對(duì)于相關(guān)的分子機(jī)理及分子標(biāo)志的認(rèn)識(shí)還很有限。本研究應(yīng)用基因芯片技術(shù)，研究喉鱗狀細(xì)胞癌的microRNA(miRNA)表達(dá)譜，篩選喉鱗癌和癌旁正常中組織差異表達(dá)的miRNA，為深入理解喉鱗癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)理，尋找鑒定相應(yīng)的分子生物學(xué)指標(biāo)志奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：選取8例手術(shù)切除新鮮凍存的喉鱗癌及其配對(duì)的癌旁正常組織，Trizol法提取總RNA，使用Agi

2、lent 2100生物分析儀鑒定總RNA的質(zhì)量；獲得了符合基因芯片雜交質(zhì)控要求的RNA樣品。使用Agilent熒光標(biāo)記與雜交試劑盒(P/N:5190-0456)，樣品經(jīng)Cy3熒光標(biāo)記后與含有容納723條人類miRNA探針的基因芯片(Agilent Human miRNA Microarray version 2Kit，P/N G4470B)進(jìn)行雜交。雜交后洗滌過(guò)的芯片以Agilent芯片激光掃描儀進(jìn)行掃描，F(xiàn)eature Extract

3、ion軟件提取數(shù)據(jù)，采用GeneSpring軟件分析數(shù)據(jù)，以t檢驗(yàn)篩選在喉鱗癌和癌旁正常組織中差異表達(dá)的miRNA(以p值<0.05和FC值>2為條件)，并用TargetScans、Pictar、Miranda、Mirtarget2等軟件對(duì)其可能的靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)。
　　 結(jié)果:共有132個(gè)miRNA在8例喉鱗癌中均有表達(dá)。喉鱗癌和癌旁正常組織中差異表達(dá)的miRNA有53個(gè)，其中22個(gè)在喉鱗癌中出現(xiàn)上調(diào)，31個(gè)出現(xiàn)下調(diào)；差異表達(dá)5

4、倍以上的miRNA共有8個(gè)，分別為miR-196b、m1R-196a、miR-375、nuR-139-5p、miR-7、miR-338-3p、miR-183和miR-370，其中m1R-196b、miR-196a和miR-375差異表達(dá)8倍以上。
　　 結(jié)論:基因芯片技術(shù)是一種有效的高通量分析喉鱗癌相關(guān)miRNA表達(dá)譜的檢測(cè)方法。通過(guò)初步的miRNA芯片分析，發(fā)現(xiàn)了53個(gè)在喉鱗癌中異常表達(dá)的miRNA，其中明顯差異表達(dá)的miRN