胞質(zhì)非特異性肌肽酶(CNDP2)、胞外基質(zhì)蛋白多糖(Versican)在胃癌中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、胃癌具有較高的發(fā)病率、轉(zhuǎn)移率和死亡率，進(jìn)一步探尋研究胃癌相關(guān)的癌基因或抑癌基因，探究胃癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)領(lǐng)域，對胃癌的預(yù)防、診斷和治療等均具有重大意義。某些癌基因或抑癌基因的表達(dá)改變是誘導(dǎo)胃癌產(chǎn)生的主要因素;而表觀遺傳改變致使基因或基因組的持續(xù)損傷，繼而改變細(xì)胞生長的微環(huán)境，從而促進(jìn)了腫瘤的侵襲和遷移。因此，本課題主要從抑癌基因和腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)分子兩個(gè)具有不同調(diào)控主體的層面，對胃癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制進(jìn)行探討。
　　 第一章胞質(zhì)非特異性

2、肌肽酶CNDP2作為抑癌基因在胃癌中的生長抑制及機(jī)制研究
　　 胞質(zhì)非特異性激肽酶(CNDP2)在人體組織中普遍表達(dá)，越來越多的實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明，該肌肽酶在腫瘤中不僅僅展現(xiàn)其酶促活性，同時(shí)還具有酶活之外的其他重要功能。然而，在胃癌中CNDP2的表達(dá)狀態(tài)及分子功能研究尚是空白。本研究，在包含胃癌癌旁正常粘膜胃癌組織樣本182例的組織芯片中，利用免疫組化、RT-PCR、Q-RT-PCR等實(shí)驗(yàn)技術(shù)分別從mRNA水平和蛋白水平檢測CNDP2

3、的表達(dá)。并結(jié)合臨床病理資料對實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析，探尋CNDP2在人胃癌中表達(dá)的臨床意義。之后，我們成功構(gòu)建上調(diào)CNDP2的質(zhì)粒GV142和下調(diào)CNDP2的慢病毒，分別轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞株AGS和SGC-7901，之后，以兩轉(zhuǎn)染細(xì)胞株為研究對象，通過CCK-8、克隆集落形成等一系列細(xì)胞學(xué)功能實(shí)驗(yàn)及周期觀察，探索胃癌細(xì)胞株CNDP2的表達(dá)對腫瘤細(xì)胞增殖、周期的影響。結(jié)果證實(shí):相對于癌旁的正常組織，CNDP2在胃癌組織中普遍低表達(dá)，且CNDP2的表達(dá)

4、在不同胃癌細(xì)胞系中隨細(xì)胞分化不同而改變。功能上，CNDP2的上調(diào)導(dǎo)致了AGS細(xì)胞株的生長抑制、凋亡增加、細(xì)胞周期G1期阻滯和ROS產(chǎn)生的增多;同時(shí)，CNDP2過表達(dá)的穩(wěn)轉(zhuǎn)株抑制了裸鼠體內(nèi)腫瘤的生長。反方面，我們證明，慢病毒轉(zhuǎn)染使CNDP2表達(dá)沉默后，轉(zhuǎn)染過的SGC-7901細(xì)胞株顯示出細(xì)胞生長增加和體內(nèi)荷鼠瘤加快生長的現(xiàn)象。此外，我們實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn):CNDP2的過表達(dá)能夠?qū)е聀38的表達(dá)上調(diào)和JNK的激活;而CNDP2表達(dá)沉默反增加了ERK

5、的磷酸化，對p38和JNK無影響。提示，在胃癌的腫瘤抑制功能上，CNDP2可能激活了不同的MAPK分子信號通路。因此，通過實(shí)驗(yàn)我們得出:胞質(zhì)非特異性肌肽酶CNDP2在胃癌中更主要的是體現(xiàn)其抑癌基因的特性，CNDP2抑制胃癌的發(fā)生發(fā)展是通過不同的MAPK分子信號通路來實(shí)驗(yàn)的。
　　 第二章胞外基質(zhì)蛋白多糖Versican在IL-11促胃癌細(xì)胞增殖遷移作用中的研究胞外基質(zhì)蛋白多糖Versican是細(xì)胞外基質(zhì)(extracellula

6、r matrix，ECM)中無處不在的表達(dá)成分。Versican在腫瘤間質(zhì)和腫瘤細(xì)胞中聚集表達(dá)，且受多種細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。研究表明Versican能夠調(diào)節(jié)ECM的穩(wěn)態(tài);同時(shí)異常表達(dá)Versican和其亞型均能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化及遷移，從而促進(jìn)腫瘤的侵襲和遷移。白介素-11(Interleukin-11，IL-11)作為一重要的細(xì)胞因子，在胃癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著廣泛的生物學(xué)效應(yīng)。在本研究首先在分析了Versican和其亞型在胃癌組織和胃

7、癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況。發(fā)現(xiàn):Versican在胃癌中顯著表達(dá)上調(diào);在不同細(xì)胞株中Versican亞型表達(dá)各異;在組織和細(xì)胞系中主要表達(dá)的是V0和V1亞型;且V1亞型在癌組織中表達(dá)上調(diào)顯著。處理胃癌細(xì)胞株AGS和MKN45以外源性IL-11，不僅能夠引起兩細(xì)胞株的增殖上調(diào)、遷移增加，而且能夠?qū)е耉0和V1亞型在細(xì)胞中的顯著表達(dá)上調(diào)。然而，當(dāng)Versican的V0和V1表達(dá)經(jīng)siRNA干擾表達(dá)沉默后，外源性IL-11的促細(xì)胞增殖遷移效應(yīng)減弱