GRK-,2-表達(dá)在高血壓心肌肥大細(xì)胞中的變化及卡托普利對其影響.pdf

1、目的：研究G蛋白偶聯(lián)受體激酶2（GRK2）在高血壓心肌肥大細(xì)胞中的表達(dá)和亞細(xì)胞的分布變化和卡托普利對肥大心肌中GRK2表達(dá)水平、活性及亞細(xì)胞分布的影響，探討GRK2在高血壓心肌肥大發(fā)生發(fā)展機制中的作用和卡托普利抑制心肌肥大的機制。 方法：6月齡WKY大鼠6只、6月齡SHHF大鼠18只。通過雙盲設(shè)計，將6月齡SHHF大鼠隨機分為3組，先將1組6月齡SHHF大鼠（6M—SHHF）與6月齡WKY大鼠（6M—WKY）同時處死，分離心臟；

2、剩余2組6月齡SHHF大鼠，其中1組予喂養(yǎng)2個月的卡托普利100mg/kg/d（8M—SHHF—D），另外1組單純予喂養(yǎng)2個月的食物（8M—SHHF），至8月齡時，將兩組SHHF大鼠處死，分離心臟。從左心室心肌組織中分別提取總蛋白、漿蛋白、膜蛋白和核蛋白的組織勻漿，通過蛋白電泳和Western Blot方法檢測GRK2在不同組織勻漿中的表達(dá)水平。對各組大鼠左心室心肌組織冰凍切片進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記，通過共聚焦顯微鏡觀察GRK2在心肌細(xì)胞中表

3、達(dá)水平和亞細(xì)胞分布。計量資料用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（x—±s）表示，采用SPSS13．0軟件對多組間差異比較采用方差分析（ANOVA），組間多重比較采用LSD—t檢驗：兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗；因素間相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)分析。以P值<0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P值<0．01為差異有非常顯著意義。 結(jié)果：6月齡WKY大鼠（6M—WKY）、6月齡SHHF大鼠（6M—SHHF）、8月齡SHHF大鼠（8M—SHHF）和卡托普利干預(yù)組S

4、HHF大鼠（8M—SHHF—D）總蛋白中GRK2表達(dá)無明顯變化（P>0．05）。胞漿中GRK2表達(dá)6M—SHHF大鼠比6M—WKY大鼠表達(dá)減少（P<0．01）；8M—SHHF大鼠比6M—SHHF大鼠GRK2表達(dá)進(jìn)一步減少（P<0．01）；而8M—SHHF—D大鼠比8M—SHHF大鼠GRK2表達(dá)增加（P<0．05）。胞膜蛋白中GRK2在6M—SHHF大鼠比6M—WKY大鼠表達(dá)增加（P<0．01）；8M—SHHF大鼠比6M—SHHF大鼠GR

5、K2表達(dá)進(jìn)一步增加（P<0．05）；而8M—SHHF—D大鼠比8M—SHHF大鼠GRK2表達(dá)減少（P<0．01）。核蛋白中無GRK2表達(dá)。共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)GRK2在SHHF大鼠胞膜特別是心肌細(xì)胞兩端的閏盤聚集明顯，卡托普利能減少GRK2在胞膜分布。相關(guān)性分析表明左心室重量和左心室心肌組織漿蛋白中GRK2表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（r=—0．792；P<0．01）；和心肌組織總蛋白中GRK2表達(dá)水平無線性相關(guān)（r=—0．118；P=0．159）