安徽碭山酥自然保護(hù)區(qū)梨種質(zhì)資源的ISSR研究.pdf

1、ISSR(簡單重復(fù)序列區(qū)間)屬于一種新的分子標(biāo)記技術(shù)，是根據(jù)基因組內(nèi)普遍存在的微衛(wèi)星基序設(shè)計(jì)單一引物，對基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增的指紋圖譜可以同時(shí)提供基因組內(nèi)多個(gè)位點(diǎn)的序列信息，被廣泛應(yīng)用于構(gòu)建分子遺傳圖譜、鑒定資源類型、探討不同生物型之間的親緣關(guān)系。 目前國內(nèi)已有不少關(guān)于果樹植物 ISSR 研究，有關(guān)梨樹資源的 ISSR 研究尚未見報(bào)道。本文采用ISSR技術(shù)，對安徽碭山酥梨自然保護(hù)區(qū)梨種質(zhì)資源26個(gè)生物型進(jìn)行研究，對合理利用

2、資源、加快梨育種進(jìn)程有著重要的意義。 研究主要結(jié)果如下： 1、從適合植物 ISSR 分析的45條引物中篩選出了16條適合梨樹ISSR分析的引物，即：Z01、Z04、Z07、Z08、Z09、Z11、Z12、Z13、Z14、Z15、Z16、Z23、Z25、Z29、Z30、Z32。 2、建立了適合梨基因組DNA的ISSR-PCR反應(yīng)最佳體系如下：總體積25μl，其中10x Buffer 2.5 μL、Taq酶0.5 U

3、、Mg<'2+>2.0 mmol/L、引物0.5 μmol/L、模板DNA40ng、dNTPs 0.20 mmol/L。 3、利用5條引物擴(kuò)增的特異帶構(gòu)建了供試的梨不同生物型DNA指紋圖譜，可以區(qū)分26個(gè)樣品中的11個(gè)生物型；利用8條引物擴(kuò)增的條帶組合構(gòu)建的指紋圖譜，可以將全部26個(gè)生物型完全分開。 4、16條引物擴(kuò)增出了174條清晰穩(wěn)定的ISSR條帶，平均每條引物擴(kuò)增出了11條ISSR條帶，其片段大小為200 bp～2

4、000 bp，150條為多態(tài)性條帶，平均多態(tài)性比率為86.2％，引物Z01、Z04及Z25擴(kuò)增的條帶多態(tài)性比率為100％，引物Z09擴(kuò)增的條帶多態(tài)性為55.6％。 5、將聚類分析結(jié)果進(jìn)行F檢驗(yàn)，當(dāng)取距離系數(shù)閥值為0.703～0.798時(shí)，全部供試生物型分為8類，各類之間遺傳距離差異達(dá)極顯著水平，分類最為合理。第1類有碭山酥梨及其8個(gè)營養(yǎng)系變異類型、鵝黃、早美酥、紅香酥、細(xì)皮酥、慈梨、庫爾勒香梨、新高、黃冠，聚類距離系數(shù)為0.70