脂多糖—干擾素α聯(lián)用誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞株U937細(xì)胞凋亡及其對(duì)caspase-8基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的:探討 Toll樣受體配體內(nèi)毒素脂多糖(LPS)與干擾素α(IFN-α)聯(lián)用對(duì)人白血病細(xì)胞株U937細(xì)胞凋亡的作用,及LPS與IFN-α聯(lián)用對(duì)U937細(xì)胞中半胱氨酸蛋白酶8(caspase-8) mRNA的表達(dá)的影響,從而探討 LPS與IFN-α聯(lián)合應(yīng)用抗白血病的機(jī)制。
　　方法:將200μg/L的LPS和(或)2000 U/mL的IFN-α作用于體外培養(yǎng)的U937細(xì)胞,根據(jù)處理體外培養(yǎng)細(xì)胞藥物的不同,將實(shí)驗(yàn)組分為三組:單用2

2、00μg/L LPS(LPS組)、2000 U/mL IFN-α(IFN-α組)及2000 U/mL IFN-α+200μg/L LPS聯(lián)用(LPS+IFN-α組);對(duì)照組是不加任何藥物處理細(xì)胞。細(xì)胞作用24、48小時(shí)后,采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè) U937細(xì)胞的各組細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率,采用Annexin V FITC/PI雙染色法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率;采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)作用48小時(shí)后U93

3、7細(xì)胞中caspase-8 mRNA的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果分析采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:1、MTT法結(jié)果顯示:作用24小時(shí)后,對(duì)照組和各藥物組細(xì)胞抑制率分別為0.021±0.006、0.258±0.005、0.374±0.001、0.438±0.012(F=156.549,組間P<0.01);隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)48小時(shí)后,對(duì)照組和各藥物組細(xì)胞抑制率分別為0.058±0.006、0.495±0.015、0.568±0.0

4、35、0.608±0.011(F=651.627,組間P<0.01)。LPS與IFN-α聯(lián)用較單用LPS、IFN-α能明顯抑制U937細(xì)胞增殖(P<0.01),且各藥物組較對(duì)照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　2、流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,各藥物組細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(24小時(shí)F=464.288,組間P<0.01;48小時(shí) F=964.565,組間P<0.01),單用LPS、IFN-α及兩者聯(lián)用

5、作用于U937細(xì)胞,隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞凋亡率逐漸升高,且LPS、IFN-α兩者聯(lián)用組細(xì)胞凋亡率明顯高于單用藥物組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　3、半定量 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,作用48小時(shí)后,LPS與IFN-α聯(lián)用U937細(xì)胞中caspase-8 mRNA的表達(dá)水平(1.992±0.037)較LPS組、IFN-α組(1.207±0.097、1.600±0.031)和對(duì)照組(0.954±0.094)均升高,差異