脂多糖—干擾素α聯(lián)用誘導(dǎo)人白血病細胞株U937細胞凋亡及其對caspase-8基因表達的影響.pdf

1、目的:探討 Toll樣受體配體內(nèi)毒素脂多糖(LPS)與干擾素α(IFN-α)聯(lián)用對人白血病細胞株U937細胞凋亡的作用,及LPS與IFN-α聯(lián)用對U937細胞中半胱氨酸蛋白酶8(caspase-8) mRNA的表達的影響,從而探討 LPS與IFN-α聯(lián)合應(yīng)用抗白血病的機制。
　　方法:將200μg/L的LPS和(或)2000 U/mL的IFN-α作用于體外培養(yǎng)的U937細胞,根據(jù)處理體外培養(yǎng)細胞藥物的不同,將實驗組分為三組:單用2

2、00μg/L LPS(LPS組)、2000 U/mL IFN-α(IFN-α組)及2000 U/mL IFN-α+200μg/L LPS聯(lián)用(LPS+IFN-α組);對照組是不加任何藥物處理細胞。細胞作用24、48小時后,采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測 U937細胞的各組細胞生長抑制率,采用Annexin V FITC/PI雙染色法流式細胞術(shù)檢測各組細胞凋亡率;采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測作用48小時后U93

3、7細胞中caspase-8 mRNA的表達。統(tǒng)計結(jié)果分析采用SPSS17.0軟件進行分析。
　　結(jié)果:1、MTT法結(jié)果顯示:作用24小時后,對照組和各藥物組細胞抑制率分別為0.021±0.006、0.258±0.005、0.374±0.001、0.438±0.012(F=156.549,組間P<0.01);隨著作用時間延長48小時后,對照組和各藥物組細胞抑制率分別為0.058±0.006、0.495±0.015、0.568±0.0

4、35、0.608±0.011(F=651.627,組間P<0.01)。LPS與IFN-α聯(lián)用較單用LPS、IFN-α能明顯抑制U937細胞增殖(P<0.01),且各藥物組較對照組比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　2、流式細胞儀檢測結(jié)果顯示,各藥物組細胞凋亡率與對照組比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(24小時F=464.288,組間P<0.01;48小時 F=964.565,組間P<0.01),單用LPS、IFN-α及兩者聯(lián)用

5、作用于U937細胞,隨著作用時間的延長,細胞凋亡率逐漸升高,且LPS、IFN-α兩者聯(lián)用組細胞凋亡率明顯高于單用藥物組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　3、半定量 RT-PCR檢測結(jié)果顯示,作用48小時后,LPS與IFN-α聯(lián)用U937細胞中caspase-8 mRNA的表達水平(1.992±0.037)較LPS組、IFN-α組(1.207±0.097、1.600±0.031)和對照組(0.954±0.094)均升高,差異