七氟烷抑制1-4周齡大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元Na+通道活性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 電壓門控性鈉離子通道(voltage-gatedsodiumchannel，VGSC)是調(diào)節(jié)大腦神經(jīng)元發(fā)育過程的關(guān)鍵。本論文通過研究0-4周齡5組正常大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元VGSC特性的變化特征，探索VGSC在出生后早期發(fā)育的關(guān)鍵期，為研究大腦快速發(fā)育的機(jī)制提供支持。在以上研究的基礎(chǔ)上研究1周齡大鼠七氟烷暴露后海馬CA1區(qū)VGSC動(dòng)力學(xué)特性在1-4周齡的變化，探索幼鼠在發(fā)育早期七氟烷暴露對大腦發(fā)育的影響，為臨床

2、嬰幼兒七氟烷麻醉提供實(shí)驗(yàn)支持。
　　 方法:
　　 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:SD大鼠分為正常組和七氟烷模型組。正常組按照出生后的周齡分為5組即出生后0周齡組(Ct0)、1周齡組(Ct1)、2周齡組(Ct2)、3周齡組(Ct3)、4周齡組(Ct4)。七氟烷模型組也按照出生后的周齡分為4組即出生后1周齡組（七氟烷暴露后0周，Sp1）、2周齡組(七氟烷暴露后1周，Sp2)、3周齡組（七氟烷暴露后2周，Sp3）、4周齡組(七氟烷暴露后3周

3、，Sp4)。
　　 1周齡七氟烷暴露模型大鼠的制備:將1周齡的SD大鼠置于七氟烷濃度為3％的麻醉預(yù)處理箱內(nèi)，持續(xù)暴露6小時(shí)。
　　 大鼠海馬CA1區(qū)單個(gè)錐體神經(jīng)元的急性分離:將大鼠吸入乙醚麻醉后迅速斷頭取腦，分離海馬，手工切成400-500μm的組織片，32℃孵育1小時(shí)，酶消化30-40分鐘后，將組織片輕輕吹打成細(xì)胞懸液，室溫下貼壁半小時(shí)。
　　 數(shù)據(jù)記錄及分析:應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)分別記錄正常5個(gè)組與七氟烷4個(gè)

4、組大鼠海馬CA1區(qū)VGSC電流，應(yīng)用軟件Clampfit10.2及0rigin6.0處理分析VGSC動(dòng)力學(xué)特性（電流密度、穩(wěn)態(tài)激活特性、穩(wěn)態(tài)失活特性、失活后恢復(fù)特性）。
　　 結(jié)果:
　　 1.正常0-4周齡組（n=10）大鼠海馬CA1區(qū)VGSC動(dòng)力學(xué)特性的變化隨著鼠齡的增大，VGSC的最大電流密度逐漸增大，Ct1、Ct2、Ct3、Ct4相對于Ct0的最大電流密度的增幅分別為（42.76±4.91）％、（146.80±7

5、.63）％、（208.79±5.28）％、（253.72±5.74）％(P＜0.05)，Ct1與Ct2之間的增幅最為大;隨著鼠齡的增加，VGSC的穩(wěn)態(tài)激活曲線向左移動(dòng)，Ct0、Ct1、Ct2的半數(shù)激活電壓(mV)逐漸減小，分別為-39.06±0.65、-44.49±0.24、-48.29±0.45(P＜0.05)，Ct2、Ct3、Ct4的半數(shù)激活電壓以及正常4個(gè)周齡組的斜率因子沒有顯著變化;隨著鼠齡的增大，VGSC的穩(wěn)態(tài)失活曲線及半數(shù)失

6、活電壓沒有顯著變化，Ct1與Ct2之間的斜率因子減小，分別為5.77±0.56、4.42±0.43(P＜0.05)，Ct0與Ct1之間、Ct2與Ct3、Ct3與Ct4之間的斜率因子沒有顯著變化;隨鼠齡的增大，VGSC失活后恢復(fù)曲線左移，Ct1、Ct2、Ct3的恢復(fù)時(shí)間常數(shù)(ms)逐漸減小，分別為8.30±0.24、7.15±0.21、6.18±0.25(P＜0.05)，而Ct0與Ct1之間、Ct3與Ct4之間沒有明顯變化。
　　

7、 2.七氟烷1-4周齡組(n=10)大鼠海馬CA1區(qū)VGSC動(dòng)力學(xué)特性的變化Ct1與Sp1組VGSC的電流密度曲線相比，Sp1組受到的抑制作用顯著，其最大電流密度分別(pA/pF)為125.58±11.83、63.55±2.18(P＜0.01)，而Ct2與Sp2、Ct3與Sp3、Ct4與Sp4的電流密度曲線及最大電流密度沒有顯著變化;Ct1與Sp1組的穩(wěn)態(tài)激活曲線向右移動(dòng)，半數(shù)激活電壓及斜率因子增加，2-4周齡正常組與七氟烷模型組VGS

8、C的穩(wěn)態(tài)激活曲線沒有顯著變化;Ct1與Sp1組的穩(wěn)態(tài)失活曲線向左移動(dòng)，半數(shù)失活電壓及斜率因子增加，2-4周齡正常組與七氟烷模型組VGSC的穩(wěn)態(tài)失活曲線沒有顯著變化;Ct1與Sp1、Ct2與Sp2組VGSC的失活后恢復(fù)曲線均向下移動(dòng)，隨著鼠齡的增大，下移的幅度減小，Sp1、Sp2、Sp3相對于正常組的失活后恢復(fù)時(shí)間延長。
　　 結(jié)論:
　　 1.正常大鼠在出生后1-2周VGSC發(fā)育最快，此期間VGSC電流密度顯著增加，半數(shù)